Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 12
1.1. Введение 12
1.2. Лабораторные методы диагностики отдаленных метастазов РПЖ 15
1.3. Роль микроРНК в диагностике отдаленных метастазов РПЖ 20
1.4. Роль микроРНК в качестве молекулярно-генетических маркеров 24
1.4.1. Внеклеточные и внутриклеточные микроРНК 24
1.4.2. Локализация аппарата, осуществляющего РНК-сайленсинг в
клетке 30
1.4.3. Все ли микроРНК входят в RISC? 38
1.4.4. Внеклеточные микроРНК и механизмы их секреции 42
1.4.5. Межклеточные взаимодействия посредством микроРНК 45
1.5. Заключение 52
ГЛАВА 2. Материалы и методы 55
2.1. Методики получения плазмы и выделения и анализа циркулирующих РНК плазмы крови 55
2.1.1. Получение плазмы 55
2.1.2 Выделение тотальной РНК из плазмы крови 55
2.1.3 Анализ профиля представленности микроРНК с помощью микрочипов Affymetrix GeneChip miRNA 4.0 57
2.2. Анализ профилей представленности микроРНК в плазме крови 58
2.2.1. Изучение профиля микроРНК пациентов без злокачественных новообразований 58
2.2.2. Изучение профиля микроРНК пациентов с локализованной и метастатической формами РПЖ 60
2.3. Анализ вклада изучаемых микроРНК в развитие процесса метастазирования рака предстательной железы 62
2.3.1. Создание клеточной линии DU-145 со стабильным нокдауном гена CD46 62
2.3.2. Характеристика клеточной линии DU-145 c инактивированным геном CD46 67
2.3.3. Создание ксенографтной модели РПЖ человека в мыши с
использованием линии DU-145 c инактивированным геном CD46 68
ГЛАВА 3. Результаты собственных исследований и их обсуждение 75
3.1. Характеристика коллекции плазмы крови 75
3.2. Анализ экспрессии отдельных микроРНК при сравнении метастатической и локализованной формы РПЖ 76
3.3. Пары микроРНК, позволяющие дифференцировать локализованной и метастатической форм РПЖ 85
3.4. Определение генов-мишеней 91
3.5. Экспериментальное исследование роли выявленных микроРНК в патогенезе рака предстательной железы на ксенографтных моделях 92
3.6. Влияние снижения экспрессии CD46 в линии DU-145 на характеристику клеточной линии, а также метастатический потенциал ксенографтов 95
Заключение 104
Выводы 109
Практические рекомендации 110
Список сокращений и условных обозначений 111
Список литературы
