Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы. 10
1.1. МтДНК - чувствительная мишень для эндогенных и экзогенных повреждающих агентов. 10
1.2. ДНКсвязывающие белки ядер и их роль в обеспечении защиты ядерного генома от действия повреждающих агентов . 19
1.3. ДНК-связывающие белки митохондрий клеток млекопитающих. 30
ГЛАВА 2. Материалы и методы. 40
2.1. Животные. 40
2.2. Основные химические реактивы. 40
2.3. Радиационная обработка. 40
2.4. Выделение митохондрий и ядер из тканей крыс и мышей . 41
2.5. Очистка митохондрий в градиенте сахарозы. 42
2.6. Очистка митохондрий с использованием дигитонина. 42
2.7. Получение нуклеоидов митохондрий. 43
2.8. Выделение кислоторастворимых белков митохондрий и гистонов ядер из печени и селезенки. 43
2.9. Очистка белков на ДЭАЭ-целлюлозе. 44
2.10. Получение ДНК-белковых комплексов in vitro. 45
2.11. Обработка ДНК-белковых комплексов перекисью водорода . 45
2.12. Исследование образования ДНК-белковых комплексов с помощью актиномицина Д. 46
2.13. Выделение мтДНК с использованием фенола. 46
2.14. Выделение мтДНК на магнитных сорбентах. 47
2.15. SDS-электрофорез белков в полиакриламидном геле. 47
2.16. Полимеразная цепная реакция (ПЦР). 48
2.17. Определение количества ДНК-белковых сшивок. 49
2.18. Определение АДФ-рибозо-синтетазной активности. 49
2.19. Определение концентрации белка. 5 О
2.20. Определение концентрации ДНК спектрофотометрическим методом. 51
2.21. Определение содержания ДНК флуоресцентным методом. 51
2.22. Статистическая обработка. 51
ГЛАВА 3. Результаты и их обсуждение. 52
3.1. Основные кислоторастворимые белки в митохондриях. 52
3.2. Исследование комплексирования основных белков митохондрий с ДНК in vitro. 60
3.3. Выяснение возможной ассоциации белков и мтДНК в митохондриях in vivo . 71
3.3.1. Формирование ДНК-белковых сшивок в митохондриях тканей крыс, подвергнутых радиационному воздействию. 74
3.3.2. Активация поли(АДФ-рибозил)ирования белков в митохондриях тканей крыс, подвергнутых радиационному воздействию. 78
3.4. Участие белков нуклеоидов митохондрий в защите мтДНК при действии повреждающих агентов. 86
Заключение. 94
Выводы. 100
Список литературы.
