ВВЕДЕНИЕ
4
ГЛАВА 1 – ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
16
1.1 – Методы оценки эффективности вакцинации
16
1.2 – Реакции адаптивного иммунного ответа как маркеры вакциноиндуцированного иммунитета
21
1.3 – Особенности постинфекционного и поствакцинального адаптивного иммунитета против чумы и антигенная специфичность их реакций
29
1.3.1 – Гуморальный противочумный иммунитет
34
1.3.2 – Клеточные реакции адаптивного противочумного иммунитета
43
1.3.3 – Вакцины против чумы и особенности поствакцинального противочумного иммунитета
47
1.3.3.1 – Вакцины первого поколения
48
1.3.3.2 – Современные разработки в области вакцин против чумы
54
1.3.4 – Живая чумная вакцина EV НИИЭГ: реакции адаптивного иммунитета и методы оценки поствакцинального иммунного ответа
60
Резюме
78
ГЛАВА 2 – МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
79
2.1 – Участники исследования
79
2.2 – Клинический материал
81
2.2.1 – Получение сывороток крови
81
2.2.2 – Выделение мононуклеарных клеток периферической крови
82
2.3 – Панель рекомбинантных белковых антигенов Y. pestis
82
2.4 – Иммунологические методы
83
2.4.1 – Постановка твердофазного иммуноферментного анализа
83
2.4.2 – Постановка иммуноблоттинга
85
2.4.2.1 – Электрофорез белковых фракций
85
2.4.2.2 – Иммуноблоттинг
86
2.4.3 – Постановка реакции бластной трансформации лимфоцитов и оценка антиген-стимулированного пролиферативного ответа
87
2.4.4 – Оценка антиген-стимулированной продукции Th1/Th2/Th17 цитокинов
87
2.5 – Статистический анализ
88
ГЛАВА 3 – РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
90
3.1 – Гуморальный ответ привитых живой чумной вакциной доноров к панели рекомбинантных белков
90
3.1.1 – Иммунореактивность сывороток вакцинированных живой чумной вакциной и наивных доноров к панели рекомбинантных белков в твердофазном иммуноферментном анализе
91
3.1.2 – Иммунореактивность сывороток вакцинированных живой чумной вакциной и наивных доноров к панели рекомбинантных белков методом иммуноблоттинга
95
3.1.3 – Комбинации белков, вовлеченных в гуморальный ответ доноров, вакцинированных живой чумной вакциной
99 3.1.4 – Определение диагностической информативности экспериментальных тестов на основе рекомбинантных сенситинов для оценки качества поствакцинального иммунного ответа 104
3.2 – Исследование реакций клеточного иммунитета у вакцинированных живой чумной вакциной с применением панели рекомбинантных белков
108
3.2.1 – Пролиферативный ответ мононуклеаров периферической крови вакцинированных живой чумной вакциной при стимуляции in vitro рекомбинатными белками
108
3.2.2 – Оценка цитокинового ответа мононуклеаров периферической крови вакцинированных живой чумной вакциной доноров на in vitro стимуляцию рекомбинантными белками
112
3.2.2.1 – Спонтанная продукция цитокинов
112
3.2.2.2 – Продукция Th1/Th2/Th17-цитокинов в ответ на in vitro стимуляцию ConA и цельноклеточными препаратами живой чумной вакцины
114
3.2.2.3 – Продукция Th1/Th2/Th17-цитокинов в ответ на in vitro стимуляцию рекомбинантными белками
119
Резюме
125
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО МАТЕРИАЛАМ, ИЗЛОЖЕННЫМ В ГЛАВЕ 3
126
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
130
ВЫВОДЫ
145
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
147
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
148
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
149
