Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 14
1.1. Методы получения органических пленок 15
1.1.1. Центрифугирование (spin-coating) 16
1.1.2. Методы «литья»: испарение растворителя (solvent evaporation), «ножевой» метод (doctor blade), метод подачи раствора (solution casting method), метод прямой адсорбции (solvent casting method) 17
1.1.3. Метод погружения (dip coating) 19
1.1.4. Метод Ленгмюра-Блоджетт 20
1.1.5. Самосборка (self assembly) 26
1.1.6. Послойная сборка (layer-by-layer self assembly) 27
1.2. Методы получения белковых кристаллов 28
1.2.1. Кристаллизация в объеме 29
1.2.2. Диффузия в парах 29
1.2.3. Встречная диффузия 30
1.2.4. Диализ
1.3. Исследования процесса получения пленок цитохрома и его взаимодействия с липидными монослоями 31
1.4. Исследования начальных этапов кристаллизации, процессов роста и получения тонких пленок лизоцима 37
1.5. Заключение 49
ГЛАВА 2. Аппаратурно-методические подходы для исследования процессов кристаллизации белков, а также кристаллов и планарных структур на их основе на полупроводящих и диэлектрических подложках 51
2.1. Получение пленок цитохром с-кардиолипин 51
2.1.1. Процедура исследования кинетики адсорбции 52
2.1.2. Изучение -А изотерм 53
2.2. Разработка метода изучения тонкой структуры органической планарной системы 53
2.2.1. Метод рефлектометрии 53
2.2.2. Метод стоячих рентгеновских волн 57
2.2.3. Разработка метода стоячих рентгеновских волн в условиях многоволнового взаимодействия рефлексов 59
2.3. Получение кристаллов лизоцима тетрагональной сингонии. Поиск условий кристаллизации 71
2.3.1. Подготовка растворов для кристаллизации 71
2.3.2. Процедура загрузки ячейки. Скрининг условий роста 2.4. Разработка герметичной ячейки для исследования упорядоченных белковых молекул на кристаллической подложке 73
2.5. Исследование растворов белков 2.5.1. Исследование растворов белков методом динамического рассеяния света 78
2.5.2. Исследование растворов белков методом малоуглового рассеяния рентгеновских лучей на дифрактометре АМУР-К 80
2.5.3. Исследование растворов белков методом малоуглового рассеяния
рентгеновских лучей на синхротронной станции ДИКСИ 83
2.6. Заключение 85
ГЛАВА 3. Получение тонкопленочных структур белков цитохрома с и лизоцима 87
3.1. Влияние начальной концентрации цитохрома с в субфазе на процесс адсорбции на монослое кардиолипина (0=5 мНм-1) 87
3.2. Влияние начального давления монослоя кардиолипина на процесс адсорбции цитохрома с 89
3.3. Анализ изотерм сжатия 90
3.4. Получение планарных структур на основе лизоцима на подложках... 96
3.5. Заключение 102
ГЛАВА 4. Исследование in situ процессов роста и деградации кристаллов лизоцима тетрагональной сингонии на различных подложках 105
4.1. Результаты поиска условий кристаллизации лизоцима тетрагональной сингонии 105
4.2. Начальная стадия формирования кристаллов 107
4.3. Стадия сформированных кристаллов 109
4.4. Деградация кристаллов 111
4.5. Заключение 114
ГЛАВА 5. In situ исследования состояния молекул лизоцима на стадии начала процесса кристаллизации методом малоуглового рассеяния рентгеновских лучей 115
5.1. Молекулярное моделирование, основанное на анализе структуры тетрагональной формы лизоцима 115
5.2. Экспериментальная секция 117
5.2.1. Исследование растворов лизоцима методом динамического рассеяния света 117
5.2.2. Исследование растворов лизоцима методом малоуглового рассеяния рентгеновских лучей на дифрактометре АМУР-К 118
5.2.3. Исследование растворов лизоцима методом малоуглового рассеяния рентгеновских лучей на синхротронной станции ДИКСИ 122
5.3. Заключение 128
Выводы и основные результаты работы 130
Список литературы 132
