Введение
1. Обзор литературы 17
1.1. Стабильность генома и роль различных факторов в ее поддержании 17
1.1.1. Вклад генетических факторов в частоту хромосомных нарушений 19
1.1.2. Влияние эпигенетических механизмов на эффективность репарации ДНК 23
1.2. Роль ретротранспозона LINE-1 в онтогенезе и обеспечении стабильности генома 29
1.2.1. Молекулярная структура LINE-1 32
1.2.2. Роль ретротранспозона LINE-1 в онтогенезе 33
1.2.3. Ретротранспозон LINE-1 и хромосомные нарушения 42
1.3. Фокусы H2AX и их влияние на хромосомную стабильность 47
1.3.1. Типы фокусов H2AX и их формирование 47
1.3.2. Функциональная значимость фокусов H2AX в онтогенезе 55
1.3.3. Фокусы H2AX и хромосомные нарушения 65
2. Материалы и методы 71
2.1. Схема исследования 71
2.2. Материалы 76
2.2.1. Экстраэмбриональные ткани спонтанных и медицинских абортусов 76
2.2.2. Лимфоциты взрослых индивидов 78
2.2.3. Опухолевые линии 81
2.3. Анализ индекса метилирования LINE-1 81
2.4. Стандартный цитогенетический анализ хромосомных аберраций 83
2.5. Оценка уровня сестринских хроматидных обменов 84
2.6. Микроядерный тест и флуоресцентная in situ гибридизация 85
2.7. Анализ фокусов белков репарации двунитевых разрывов ДНК 89
2.8. Воздействие ионизирующим излучением in vitro 91
2.9. Методика анализа экспрессионных профилей генов в лимфоцитах индивидов с различным уровнем фокусов белков репарации ДНК 92
2.10. Методика работы с опухолевыми клеточными линиями 93
2.11. Методика работы с нокаутными клеточными линиями 94
2.12. Статистический анализ данных 103
3. Результаты и обсуждение 104
3.1. Влияние индекса метилирования LINE-1 на частоту хромосомных нарушений 104
3.1.1. Нарушения глобального уровня метилирования генома в экстраэмбриональных тканях у спонтанно погибших эмбрионов человека 104
3.1.2. Числовые хромосомные нарушения в клетках эмбрионов человека с различным глобальным уровнем метилирования генома 112
3.1.3. Связь глобального уровня метилирования генома и частоты хромосомных нарушений в соматических клетках взрослых индивидов 118
3.1.4. Механизмы связи глобального уровня метилирования генома и частоты хромосомных нарушений в соматических клетках человека в ходе онтогенеза 132
3.2. Спонтанный уровень фокусов H2AX и хромосомные нарушения 140
3.2.1. Уровень фокусов белков репарации и радиочувствительность опухолевых клеток 140
3.2.2. Уровень фокусов белков репарации двунитевых разрывов ДНК и частота хромосомных нарушений в лимфоцитах человека при лучевой терапии in vivo 146
3.2.3. Уровень фокусов H2AX и хромосомные нарушения в соматических клетках in vitro 158
3.2.4. Связь уровня фокусов H2AX с экспрессией генов в нормальных соматических клетках человека 170
3.2.5. Анализ влияния нокаута генов ADAMTS1, THBS1, WHSC1 и RBFOX2 на клеточную радиочувствительность 208
3.2.4 Механизмы связи уровня фокусов H2AX и спонтанных и радиационно-индуцированных хромосомных нарушений в соматических клетках человека 219
Заключение 234
Выводы 240
