ВВЕДЕНИЕ .................................................................................................................... 6
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ .......................................................................... 15
1.1 Коронавирусная инфекция COVID-19 .................................................................. 15
1.2 Структура вируса SARS-CoV-2 ............................................................................. 17
1.3 Жизненный цикл вируса SARS-CoV-2 ................................................................. 19
1.4 Функции белков вируса SARS-CoV-2 и возможность их использования при
создании профилактических препаратов ................................................................... 22
1.4.1 Гликопротеин S .................................................................................................... 22
1.4.2 Оболочечный белок E .......................................................................................... 25
1.4.3 Нуклеокапсидный белок N ................................................................................. 25
1.4.4 Основная протеаза MPro и папаин-подобная протеаза PLPro ........................ 26
1.4.5 Другие неструктурные белки .............................................................................. 27
1.4.6 Белки открытой рамки считывания (ORF) ........................................................ 29
1.5 Особенности иммунного ответа в отношении вируса SARS-CoV-2 ................. 30
1.6 Генетические особенности разных вариантов вируса SARS-CoV-2 ................. 32
1.7 Модели COVID-19 у животных для оценки эффективности профилактических
и терапевтических средств ........................................................................................... 38
1.8 Разработка вакцин для профилактики COVID-19 ............................................... 43
1.9 Заключение .............................................................................................................. 49
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ .................................................................. 51
2.1 Материалы ............................................................................................................... 51
2.1.1 Оборудование ....................................................................................................... 51
2.1.2 Вирусы .................................................................................................................. 52
2.1.3 Линии клеток млекопитающих .......................................................................... 52
2.1.4 Животные ............................................................................................................. 52
2.1.5 Сыворотки крови вакцинированных добровольцев ......................................... 53
2.1.6 Среды для культивирования эукариотических клеток .................................... 53
2.1.7 Наборы .................................................................................................................. 54
2.1.8 Иммунобиологические препараты ..................................................................... 54
2.2 Методы ..................................................................................................................... 56
2.2.1 Работа с вирусом SARS-CoV-2 ........................................................................... 56
2.2.2 Наработка и анализ инфекционной активности SARS-CoV-2 ........................ 56
2.2.2.1 Наработка SARS-CoV-2 ................................................................................... 56
2.2.2.2 Определение титра вируса SARS-CoV-2 по TCID50 ...................................... 57
2.2.2.3 Определение количества вирусных частиц методом ОТ-ПЦР-РВ .............. 57
2.2.3 Анализ уровня вируснейтрализующих антител ............................................... 57
2.2.4 Исследование протективной эффективности вакцины Гам-КОВИД-Вак ..... 58
2.2.4.1 Содержание животных ..................................................................................... 58
2.2.4.2 Иммунизация животных .................................................................................. 59
2.2.4.3 Получение сыворотки крови животных ......................................................... 59
2.2.4.5 Исследование протективной активности вакцины при интраназальном
заражении сирийских хомячков вирусом SARS-CoV-2 ........................................... 60
2.2.4.6 Исследование протективной активности вакцины при интраназальном
заражении трансгенных мышей вирусом SARS-CoV-2 ............................................ 60
2.2.4.7 Определение вирусной нагрузки в легких ..................................................... 61
2.2.5 Гистологический анализ ..................................................................................... 62
2.2.6 Статистические и биоинформатические методы .............................................. 63
2.2.6.1 Статистическая обработка результатов исследований ................................. 63
2.2.7.2 Биоинформатические методы .......................................................................... 63
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ ....................... 64
3.1 Общая схема исследования .................................................................................... 64
3.2 Исследование нейтрализующей активности сывороток крови вакцинированных
Гам-КОВИД-Вак добровольцев в отношении различных вариантов вируса SARSCoV-
2 .............................................................................................................................. 65
3.2.1 Исследование нейтрализующей активности сывороток крови
вакцинированных Гам-КОВИД-Вак добровольцев в отношении вируса SARSCoV-
2 вариантов Альфа, Бета, Гамма и Дельта ......................................................... 65
4
3.2.2 Исследование нейтрализующей активности сывороток крови
вакцинированных Гам-КОВИД-Вак добровольцев в отношении вируса SARSCoV-
2 варианта Омикрон ............................................................................................. 67
3.3 Адаптация модели COVID-19 у лабораторных животных ................................. 70
3.3.1 Адаптация модели COVID-19 у сирийских хомячков ..................................... 70
3.3.2 Адаптация модели COVID-19 у hACE2-трансгенных мышей ........................ 79
3.4 Исследование протективной эффективности вакцины Гам-КОВИД-Вак в
отношении вируса SARS-CoV-2 вариантов Альфа, Бета, Гамма и Дельта на модели
COVID-19 у hACE2-трансгенных мышей .................................................................. 82
3.5 Адаптация модели COVID-19 у hACE2-трансгенных мышей для исследования
протективной эффективности в отношении вируса SARS-CoV-2 вариант Омикрон
В.1.1.529 ......................................................................................................................... 88
3.6 Исследование протективной эффективности различных антигенных вариантов
вакцины Гам-КОВИД-Вак на моделях COVID-19 у лабораторных животных ...... 91
3.6.1 Исследование протективной эффективности вакцины Гам-КОВИД-Вак
Дельта на модели COVID-19 у hACE2-трасгенных мышей ..................................... 91
3.6.2 Исследование протективной эффективности вакцин Гам-КОВИД-Вак
Дельта, Омикрон и Дельта-Омикрон на модели COVID-19 у hACE2-трансгенных
мышей ............................................................................................................................ 93
3.6.3 Исследование протективной эффективности вакцин Гам-КОВИД-Вак
Омикрон и Дельта-Омикрон на модели COVID-19 у сирийских хомячков с
индуцированной иммуносупрессией ........................................................................ 100
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ .......................................................................... 102
ЗАКЛЮЧЕНИЕ ......................................................................................................... 115
ВЫВОДЫ ................................................................................................................... 116
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ ...................... 118
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ ............................................. 122
ПРИЛОЖЕНИЕ А .................................................................................................... 150
БЛАГОДАРНОСТИ ................................................................................................. 159
