Введение
1. Обзор литературы 11
1.1 Значение сохранения биообъектов для медицины 11
1.2 Механизмы холодового повреждения биообъектов 13
1.3 Криопротекторы и ограждающие растворы для консервации 16
1.4 Побочные эффекты консервирующих растворов 19
1.5 Новые способы консервации биообъектов 23
1.6 Консервация с использованием инертных газов 26
2. Методические вопросы исследования 32
2.1 Общая характеристика экспериментального материала 32
2.1.1 Характеристика эритроцитов 32
2.1.2 Общая характеристика лабораторных животных 33
2.1.3 Общая характеристика тканей, использованных для оценки морфофункциональных характеристик 34
2.1.4 Криоконсервация кожных лоскутов в ДМСО (диметилсульфоксид) и отогрев 35
2.1.5 Характеристика клеток, использованных в исследовании. Получение первичной культуры. Субкультивирование . 36
2.2 Гипербарическая и клатратная консервация в Xe 40
2.2.1 Описание устройства для консервации в гипербарии и клатратах Xe 41
2.2.2 Принцип действия устройства 44
2.2.3 Получение и визуализация клатратов ксенона в биообъектах. Декомпрессия (расконсервация) образцов 44
2.2.4 Использованные в экспериментах газы 45
2.3 Методы исследования жизнеспособности клеток и тканей 46
2.3.1 Расчет показателей гемолиза 46
2.3.2 Кондуктометрический метод оценки сохранности клеток 46
2.3.3 Исследование жизнеспособности клеток с помощью МТТ теста 47
2.3.4 Исследование способности тканей к экспансии фибробластов 48
2.3.5 Исследование жизнеспособности клеток с помощью окраски флуоресцентным красителем Life-Dead viability Kit 48
2.4 Исследование сохранности морфологических характеристик клеток и тканей 50
2.4.1 Методы окраски и морфометрия окрашенных препаратов клеток 50
2.4.2 Методы окраски и морфометрия окрашенных препаратов тканей 50
2.4.3 Исследование мембран клеток с помощью метода сканирующей электронной микроскопии 51
2.5 Методы исследования функциональной сохранности клеток и тканей 52
2.5.1 Исследование осмотической резистентности Эр 52
2.5.2 Изучение динамики приживаемости кожных лоскутов лабораторных животных на модели аутотрансплантации 53
2.5.3 Исследование скорости оседания Эр 56
2.5.4 Исследование клоногенной активности культивируемых клеток 56
2.5.5 Исследование синтетической активности клеток по включению в ДНК 214С –тимидина 57
2.6 Статистическая обработка данных 57
3. Консервация эритроцитов с помощью ксенона и его клатратов 60
3.1 Исследование морфофункциональных характеристик Эр 60
3.2 Исследование сохранности мембран эритроцитов и определение их осмотической резистентности 64
3.3 Электронная микроскопия эритроцитов и оценка повреждений на разных сроках 74
3.4 Заключение 78
4. Консервация кожных лоскутов в гипербарии и клатратах ксенона 81
4.1 Исследование сохранности кожных лоскутов in vivo 82
4.2 Оценка приживаемости кожных лоскутов при различных способах консервации на 14-е и 28-е сутки после трансплантации 87
4.3 Исследование сохранности кожных лоскутов in vitro 92
4.4 Заключение 98
5. Исследование механизмов консервирующего эффекта ксенона на ядросодержащие клетки 102
5.1 Исследование жизнеспособности и морфофункциональных характеристик ММСК, консервированных в различных вариантах использования ксенона 103
5.2 Заключение 111
Общее заключение 114
Список литературы 125
