Введение
Глава 1. Обзор литературы 23
1.1. ВИЧ-инфекция, как мировая и общероссийская проблема современного здравоохранения 23
1.2. Фармакологическая профилактика ВИЧ-инфекции 30
1.2.1. Доконтактная профилактика ВИЧ-инфекции 30
1.2.2. Постконтактная профилактика ВИЧ-инфекции 34
1.2.3. Терапия, как профилактика ВИЧ-инфекции 36
1.2.4. Профилактика передачи ВИЧ-инфекции от матери ребенку 37
1.2.5. Иммунопрофилактика ВИЧ-инфекции 37
1.2.6. Топическая профилактика ВИЧ-инфекции 42
1.3. Мукозальный иммунный ответ на ВИЧ-инфекцию 48
1.4. Микробициды – новый класс медицинских иммунобиологических препаратов для топической профилактики ВИЧ-инфекции 52
1.4.1. Микробициды на основе поверхностно активных веществ 55
1.4.2. Микробициды на основе стабилизаторов pH и усилителей кислотности 57
1.4.3. Микробициды на основе полианионов и дендримеров 58
1.4.4. Микробициды на основе полисахарид-связывающих веществ 62
1.4.5. Микробициды на основе ингибиторов репликации ВИЧ 63
1.5. Гуминовые вещества и перспективы их применения в медицине 64
1.5.1. Общая характеристика гуминовых веществ 64
1.5.2. Применение гуминовых веществ в медицине 71
1.5.3. Гуминовые вещества как перспективные компоненты для разработки микробицидов 77
Глава 2. Материалы и методы 81
2.1. Характеристика объекта исследования 81
2.1.1. Описание исследуемых фракций гуминовых веществ 81
2.1.2. Элементный количественный анализ исследуемых фракций гуминовых веществ 83
2.1.3. Потенциометрическое титрование исследуемых фракций гуминовых веществ 84
2.1.4. 13С-ЯМР-спектроскопия исследуемых фракций гуминовых веществ 84
2.1.5. Обращнно-фазная хроматография исследуемых фракций гуминовых веществ 85
2.1.6. Масс-спектрометрия ионно-циклотронного резонанса с преобразованием Фурье (ИЦР-МС) исследуемых фракций гуминовых веществ 85
2.2. Иммуновирусологические подходы к определению наиболее подходящей фракции гуминовых веществ для создания кандидатного микробицида 86
2.2.1. Исследование антиретровирусной активности фракций гуминовых веществ на референс-штаммах ВИЧ-1 86
2.2.2. Исследование антиретровирусной активности фракций гуминовых веществ на актуальном для Российской Федерации изоляте ВИЧ 99
2.2.3. Исследование механизмов действия анти-ВИЧ-активности фракций гуминовых веществ 107
2.2.4. Исследование противовирусной активности фракций гуминовых веществ на других вирусах 110
2.2.5. Исследование действие фракций гуминовых веществ на адсорбцию липополисахаридов на эритроцитах 114
2.3. Структурно-функциональные особенности фракций гуминовых веществ 118
2.3.1. Изучение молекулярного состава гуминовых веществ методом масс-спектрометрии ионно-циклотронного резонанса с преобразованием Фурье 118
2.3.2. Корреляционный анализ фракций гуминовых веществ 118
2.3.3. Анализ супрамолекулярного пространства фракций гуминовых веществ 119
2.4. Разработка кандидатных микробицидов на основе гуминовых кислот и их химико-фармацевтическая характеристика 119
2.4.1. Стандартизация фармацевтической субстанции кандидатного микробицида на основе гуминовых кислот 119
2.4.2. Приготовление кандидатных микробицидов на основе гуминовых кислот 121
2.4.3. Качественное и количественное определение фармацевтической субстанции кандидатного микробицида 122
2.5. Исследование фармакокинетических параметров кандидатных микробицидов на основе гуминовых кислот 122
2.5.1. Исследование проницаемости фармацевтической субстанции кандидатных микробицидов на основе гуминовых кислот 122
2.5.2. Исследование проницаемости кандидатных микробицидов на основе гуминовых кислот 123
2.5.3. Исследование распределения по органам и тканям фармацевтической субстанции кандидатного микробицида на основе гуминовых кислот 124
2.6. Исследование острой и хронической токсичности фармацевтической субстанции и лекарственной формы кандидатного микробицида на основе гуминовых кислот 125
2.6.1. Исследование острой токсичности фармацевтической субстанции и лекарственной формы кандидатного микробицида на основе гуминовых кислот 125
2.6.2. Исследование хронической токсичности лекарственной формы кандидатного микробицида на основе гуминовых кислот 127
2.7. Исследование иммунотоксического действия фармацевтической субстанции кандидатного микробицида на основе гуминовых кислот 131
2.7.1. Исследование гуморального иммунного ответа на введение гуминовых кислот 131
2.7.2. Исследование клеточного иммунного ответа на введение гуминовых кислот 133
2.7.3. Исследование поликлональной активации на введение гуминовых кислот 134
2.7.4. Исследование фагоцитарной активности на введение гуминовых кислот 136
2.8. Исследование аллергизирующих свойств фармацевтической субстанции кандидатного микробицида на основе гуминовых кислот 138
2.8.1. Исследование изменения уровня антител класса IgE на введение гуминовых кислот 138
2.8.2. Исследование развития анафилактической реакции у мышей на введение гуминовых кислот 139
2.8.3. Исследование развития сенсибилизации у мышей на введение гуминовых кислот 142
2.8.4. Исследование аллергизирующего действия гуминовых кислот методом эпикутанных аппликаций на морских свинках 144
2.9. Исследование подавления иммуновоспалительной активности фармацевтической субстанцией кандидатного микробицида на основе гуминовых кислот 145
2.9.1. Исследование влияния гуминовых кислот на острое иммунное воспаление 145
2.9.2. Исследование влияния гуминовых кислот на хроническое аутоиммунное воспаление 146
2.10. Исследование антиоксидантной активности фармацевтической субстанции кандидатного микробицида на основе гуминовых кислот 147
2.10.1. Исследование антиоксидантной активности гуминовых кислот на модели окислительного стресса 147
2.10.2. Исследование антиоксидантной активности гуминовых кислот на модели фенилгидразин-индуцированной гемолитической анемии 151
2.11. Статистическая обработка результатов исследования 152
Глава 3. Результаты 154
3.1. Характеристика фракций гуминовых веществ 154
3.1.1. Результаты элементного количественного анализа и потенциометрического титрования исследуемых фракций гуминовых веществ 155
3.1.2. Результаты 13С-ЯМР-спектроскопии исследуемых фракций гуминовых веществ 157
3.1.3. Результаты обращнно-фазной хроматографии исследуемых фракций гуминовых веществ 160
3.1.4. Результаты масс-спектрометрии исследуемых фракций гуминовых веществ 162
3.2. Иммуновирусологические подходы к определению наиболее подходящей фракций гуминовых веществ для создания кандидатного микробицида 166
3.2.1. Исследование антиретровирусной активности фракций гуминовых веществ на референс-штаммах ВИЧ-1 166
3.2.2. Исследование антиретровирусной активности фракций гуминовых веществ на актуальном для Российской Федерации изоляте ВИЧ 178
3.2.3. Исследование механизмов действия анти-ВИЧ-активности фракций гуминовых веществ 190
3.2.4. Исследование противовирусной активности фракций гуминовых веществ на других вирусах 194
3.2.5. Исследование действие фракций гуминовых веществ на компоненты врожденного иммунитета 197
3.3. Структурно-функциональные особенности фракций гуминовых веществ 201
3.3.1. Корреляционный анализ фракций гуминовых веществ 201
3.3.2. Анализ супрамолекулярного пространства фракций гуминовых веществ 206
3.4. Разработка кандидатных микробицидов на основе гуминовых кислот и их химико-фармацевтическая характеристика 208
3.4.1. Стандартизация фармацевтической субстанции кандидатного микробицида на основе гуминовых кислот 208
3.4.2. Приготовление кандидатных микробицидов на основе гуминовых кислот 212
3.4.3. Качественное и количественное определение фармацевтической субстанции в кандидатном микробициде на основе гуминовых кислот 213
3.5. Исследование фармакокинетических параметров кандидатных микробицидов на основе гуминовых кислот 215
3.5.1. Исследование проницаемости фармацевтической субстанции кандидатных микробицидов на основе гуминовых кислот 215
3.5.2. Исследование проницаемости кандидатных микробицидов на основе гуминовых кислот 216
3.5.3. Исследование распределения по органам и тканям фармацевтической субстанции кандидатного микробицида на основе гуминовых кислот 218
3.6. Исследование острой и хронической токсичности фармацевтической субстанции и лекарственной формы кандидатного микробицида на основе гуминовых кислот 222
3.6.1. Исследование острой токсичности фармацевтической субстанции и лекарственной формы кандидатного микробицида на основе гуминовых кислот 222
3.6.2. Исследование хронической токсичности лекарственной формы кандидатного микробицида на основе гуминовых кислот 224
3.7. Исследование иммунотоксического действия фармацевтической субстанции кандидатного микробицида на основе гуминовых кислот 232
3.7.1. Исследование гуморального иммунного ответа на введение гуминовых кислот 232
3.7.2. Исследование клеточного иммунного ответа на введение гуминовых кислот 233
3.7.3. Исследование поликлональной активации на введение гуминовых кислот 234
3.7.4. Исследование фагоцитарной активности на введение гуминовых кислот 235
3.8. Исследование аллергизирующих свойств фармацевтической субстанции кандидатного микробицида на основе гуминовых кислот 237
3.8.1. Исследование изменения уровня антител класса IgE на введение гуминовых кислот 237
3.8.2. Исследование развития анафилактической реакции у мышей на введение гуминовых кислот 239
3.8.3. Исследование развития сенсибилизации у мышей на введение гуминовых кислот 240
3.8.4. Исследование аллергизирующего действия гуминовых кислот методом эпикутанных аппликаций на морских свинках 242
3.9. Исследование подавления иммуновоспалительной активности фармацевтической субстанцией кандидатного микробицида на основе гуминовых кислот 243
3.9.1. Исследование влияния гуминовых кислот на острое иммунное воспаление 243
3.9.2. Исследование влияния гуминовых кислот на хроническое аутоиммунное воспаление 246
3.10. Исследование антиоксидантной активности фармацевтической субстанции кандидатного микробицида на основе гуминовых кислот 253
3.10.1. Исследование антиоксидантной активности гуминовых кислот на модели окислительного стресса 253
3.10.2. Исследование антиоксидантной активности гуминовых кислот на модели фенилгидразин-индуцированной гемолитической анемии 264
Глава 4. Заключение и обсуждение результатов 269
4.1. Характеристика фракций гуминовых веществ 269
4.2. Изучение анти-ВИЧ-активности фракций гуминовых веществ и выбор наиболее подходящей фракции для создания кандидатного микробицида 273
4.3. Филогенетический анализ современной эпидемии ВИЧ инфекции/СПИДа и изучение анти-ВИЧ-активности препаратов гуминовых веществ на актуальном изоляте ВИЧ 279
4.4. Изучение противовирусной активности фракций гуминовых веществ на других оболочечных и безоболочечных вирусах 281
4.5. Изучение действия фракций гуминовых веществ на компоненты врожденного иммунитета 285
4.6. Выявление структурно-функциональных особенностей фракций гуминовых веществ 288
4.7. Химико-фармацевтические особенности кандидатного микробицида на основе гуминовых кислот 288
4.8. Острая и хроническая токсичность кандидатного микробицида на основе гуминовых кислот 297
4.9. Иммунологическая безопасность кандидатного микробицида на основе гуминовых кислот 298
4.10. Иммунологическая безопасность кандидатного микробицида на основе гуминовых кислот 299
4.11. Подавление иммуновоспалительной активности фармацевтической субстанцией кандидатного микробицида на основе гуминовых кислот 300
4.12. Антиоксидантная активность фармацевтической субстанции кандидатного микробицида на основе гуминовых кислот 301
Выводы 306
Список литературы 308
