Введение
1. Новые подходы в генотераттии. Рекомбинантные ДНК как инструменты переноса генов и потенциальные лекарственные препараты 9
1.1.1. Преимущества и недостатки молекулярных структур, переносящих гены 10
1.1.2. "Терапевтический ангиогенез" как часть генотерапии 13
1.2. Ангиогенез 20
1.2.1. Ангиогенин и его роль в ангиогенезе: функциональная активность, генетическая и белковая структура 23
1.2.2. Гомеобоксные гены белковых ростовых факторов и регуляторная роль их белков в процессах морфогенеза и ангиогенеза 28
1.3. Ранний постнатальный онтогенез как чувствительная модель для гснотерапевтических воздействий (переноса клонированных генов) 33
1.4. Биореакторы в современной микробиологии и биотехнологии (сравнительный аспект) 39
1.5. Теоретическое обоснование процесса вихревого принципа 43 ферментации
1.5. Заключение по обзору литературы 47
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 48
2.1. Реагенты, реактивы и оборудование 48
2.2. Ферменты 49
2.3. Буферные системы и среды 49
2.4. Бактериальные штаммы 49
2.5. Плазмиды, содержащие промоторы генов млекопитающих, как системы доставки и временного увеличения дозы гена 50
2.6. Методы 51
2.6.1. Методика трансформации рекомбинантных плазмид в штамм co//JM109 51
2.6.2. Метод наработки бактерий Е. coli, трансформированных рекДНК, в газо-вихревых биореакторах «Биок» 52
2.6.3. Аналитический метод выделения рекДНК 54
2.6.4. Методика тестирования препаратов рекомбинантной ДНК, содержащих клонированный ген ангиогенина человека, на хориоаллантоисной мембране развивающихся куриных эмбрионов (ХАО РКЭ) 55
2.6.5. Методика введения биопрепаратов в организм новорожденных мышей линии Tg-8 55
Глава. 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 57
3.1. Изучение параметров получения полупрепаративных количеств биомассы Е. coli, содержащей рекомбинантные плазм иды, в газо-вихревых реакторах «Биок» 57
3.2. Отработка методов получения из полупрепаративных количеств биомассы Е. coli рекомбинантных ДНК, обладающих ангиогенным эффектом 76
3.3. Результаты тестирования препаратов клонированного гена ангиогенина человека на хориоаллантоисной мембране развивающихся куриных эмбрионов (ХАО РКЭ) 82
3.4. Экспериментальные данные о влиянии рекомбинантной ДНК со вставкой гена ангиогенина на ранний постнатальный онтогенез мышей линии Tg-8 85
Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ 90
Заключение 95
Выводы 96
Список литературы 97
