Введение
Обзор литературы 5
Индуцированные абзимы 5
Природные каталитические антитела 19
Антиидиотипические антитела 38
Заключение 55
Материалы и методы 57
Химические реактивы и материалы 57
Базовые методы 58
Экспрессия рекомбинантных белков в клетках Е. coli 59
Получение рекомбинантных клонов вируса AcMNPV 60
Аналитическая экспрессия гликопротеина gpl20 61
Препаративная экспрессия, выделение и очистка гликопротеина gpl20 62
Подготовка образца для масс-спектрометрии методом MALDI 62
Триптический гидролиз для масс-спектрометрического анализа 63
Масс-спектрометрия методом MALDI 63
Масс-спектрометрический анализ продуктов распада trx-gp 120I-III по методу SELDI 63
Синтетический антиген 64
Иммунизация мышей 64
Проточная цитофлуориметрия 65
Выделение и очистка антител 65
Иммуноферментный анализ 65
Получение флуоресцентных субстратов gpl20-<№TU, и БСА-ФИТЦ66 Анализ продуктов гидролиза gpl20 при помощи ДСН-ПААГ и иммуноблоттинга 68
Детекция гидролиза рибонуклеазы А антителом 6В8Е12 68
Результаты 70
Получение каталитических антител, расщепляющих поверхностный гликопротеин ВИЧ-1 gpl20 70
Получение слитных белков на основе фрагментов gpl20 для иммунизации и изучения свойств антител. Прокариотическая экспрессия 73
Экспрессия gpl20 в бакуловирусной системе 80
Каталитические свойства полученных антител 85
Установление сайт-специфичности протеолитических антител к gpl20 89
Антиидиотипическое протеолитическое антитело 6В8Е12 93
Обсуждение результатов 103
Выводы 106
Список литературы 107
Список сокращений 127
