Введение
1. Терминация трансляции и прионы дрожжей (обзор литературы) 9
1.1. Факторы, влияющие на эффективность терминации трансляции у Saccharomyces cerevisiae 10
1.1.1. Факторы терминации трансляции у дрожжей 11
1.1.1.1. Фактор eRF 1 (Sup45) 12
1.1.1.2. Фактор eRF3 (Sup35) 15
1.1.1.3. Другие компоненты аппарата терминации трансляции 17
1.1.1.4. Транскрипционная регуляция экспрессии генов, кодирующих факторы терминации трансляции 20
1.1.1.5. Белки, взаимодействующие с факторами терминации трансляции 20
1.1.2. Факторы, влияющие на нонсенс-супрессию 21
1.1.2.1. Супрессорные тРНК 21
1.1.2.2. Компоненты инициации и элонгации трансляции 24
1.1.2.3. Компоненты рибосомы 27
1.1.2.4. Системы регуляции стабильности мРНК 30
1.2. Связь прионов с терминацией трансляции у дрожжей 36
1.2.1. Прионы дрожжей 36
1.2.1.1. Основные свойства прионов дрожжей 37
1.2.1.2. [PSI+] 42
1.2.1.3. [PIN+]/[RNQl+] 45
1.2.1.4. [URE3] 45
1.2.1.5. Прионные свойства Q/N-богатых транскрипционных факторов 47
1.2.1.6. Прионоподобный детерминант ISP+
1.2.2. Регуляция прионизации у дрожжей 48
1.2.2.1. Система клеточных шаперонов 48
1.2.2.2. Компоненты убиквитин-протеасомного пути деградации
1.2.2.3. Компоненты систем контроля качества укладки белков (РС)С)
1.2.3. Модельные системы для поиска и изучения факторов, влияющих на прионы 52
1.2.3.1. Токсичность прионов [PSI+] и [РШ+] 52
1.2.3.2. Модели токсичности хантингтина/polyQ в дрожжахОшибка! Закладка не опр
1.2.3.3. Тест-система синтетической летальности фактора [PSI+] в комбинации с мутациями sup45 54
1.3. Цель и задачи исследования 55
2. Материалы и методы 56
Среды и методы культивирования ОТ-ПЦРРВ 63
3. Результаты 65
3.1. Скрининг геномной библиотеки, направленный на выявление новых факторов, влияющих на терминацию трансляции 65
3.2. Сверхэкспрессия естественной супрессорной тРНКТгр ослабляет синтетическую летальность 69
3.3. Влияние TEF2 и генов других факторов элонгации трансляции на синтетическую летальность и нонсенс-супрессию 70
3.4. Влияние генов МСМ1, SFP1 и других Q/N-богатых транскрипционных факторов на синтетическую летальность
3.4.1. Влияние гена МСМ1 на синтетическую летальность 73
3.4.2. Влияние Q/N-богатых транскрипционных факторов на синтетическую летальность и нонсенс-супрессию 74
3.4.3. Характеристика Q/N-богатых транскрипционных факторов по их влиянию на жизнеспособность штаммов и супрессию 76
3.4.4. Q/N-богатые транскрипционные факторы могут влиять на экспрессию SUP35 и SUP45 79
3.4.5. SFP1 вызывает токсичность приона [PSI+] и влияет на агрегацию Sup35- 81
3.4.6. Токсичность, вызванная SFP1, компенсируется сверхэкспрессией SUP35C и SIS1, но не SUP45 83
3.4.7. Sfpl формирует SDS-устойчивые агрегаты in vivo, которые могут влиять на [PSF] 86
3.5. Влияние генов HLJ1, CUR1, других шаперонов и ассоциированных с ними факторов на синтетическую летальность 92
3.5.1. Сверхэкспрессия HLJ1, CUR1 и BTN2 усиливает синтетическую летальность 92
3.5.2. CUR1, но не BTN2 усиливает нонсенс-супрессию в штаммах [PSI+], но не [psi ] 93
3.5.3. Curl не влияет на свойства агрегатов [PSI+], на изгнание приона и на его индукцию 96
3.5.4. Делеционный анализ гена CUR1 98
3.5.5. Скрининг основных шаперонов клеток дрожжей в тест-системе синтетической летальности и их влияние на прионы [PSP] и [URE3] 99
3.5.6. Влияние Curl на прионы [PSP] и [URE3] компенсируется коэкспрессией SIS1 103
3.5.7. Избыток Curl усиливает ядерный импорт Sisl, а избыток Sisl его снижаетЮб
3.5.8. Сверхэкспрессия Curl не влияет на связывание шаперонов с агрегатами [PSP] 109
4. Обсуждение результатов 115
4.1. Кодон-специфичное снижение синтетической летальности при сверхэкспрессии гена тРНКТгр 115
4.2. Влияние факторов элонгации трансляции на нонсенс-супрессию и синтетическую летальность 116
4.3. Анализ Q/N-богатых регуляторов транскрипции в тест-системе. 118
4.4. Транскрипционный регулятор SFP1 и прионная токсичность [PSI+] 120
4.5. Действие фактора сортинга Curl на прионы опосредовано ядерным импортом Sisl 126
4.6. Заключение 128
5. Выводы 131
