Введение
Глава 1. Теоретическое обоснование получения трансгенных растений с новыми заданными признаками (обзор литературы) 16
1.1. Создание растений, устойчивых к насекомым-вредителям 18
1.2. Подавление экспрессии генов в генетической инженерии и биотехнологии растений 24
1.2.1. Использование антисмысловых РНК для подавления экспрессии генов в растениях 26
1.2.2. РНК-интерференция у растений 30
1.2.3. Применение РНК-интерференции в генетической инженерии растений 33
1.2.4. Создание растений, устойчивых к фитопатогенам 36
1.2.5. Изменение пищевых качеств трансгенных растений 38
1.2.6. Изменение метаболизма в трансгенных растениях 41
1.3. Конструирование трансгенных растений-продуцентов целевых белков 44
1.3.1. Рекомбинантные белки, экспрессируемые в растениях 46
1.3.2. Экспрессия рекомбинантных антител в трансгенных растениях 48
1.3.3. Синтез субъединичных вакцин в трансгенных растениях 56
1.4. Получение свободных от дополнительных генетических маркеров растений 64
Экспериментальная часть
Глава 2. Объекты и методы исследования 67
2.1. Бактериальные штаммы и плазмиды 67
2.2. Растения 67
2.3. Микробиологические среды 68
2.4. Среды для культивирования растений и протопластов 68
2.5. Реактивы, растворы и ферменты 68
2.6. Конструирование плазмид для трансформации растений 68
2.7. Трансформация растений 71
2.8. Анализ трансгенных растений 72
Глава 3. Создание и анализ трансгенных растений, устойчивых к насекомым-вредителям 81
3.1. Получение и молекулярно-генетический анализ трансгенных растений с различными вариантами гена 81
3.2. Анализ инсектицидной активности полученных трансгенных растений 85
3.3. Комбинированное использование регулируемых промоторов и технологии прививок для получения растений, синтезирующих чужеродные белки в определенных органах и тканях 91
3.4. Конструирование плазмид с геном CrylA(b), пригодных для трансформации широкого круга хозяев 96
Глава 4. Подавление экспрессии генов с помощью антисмысловых РНК и РНК-интерференции 100
4.1. Ингибирование экспрессии гена неомицинфосфотрансферазы II в протопластах Nicotiana tabacum L. с помощью антисмысловых РНК.. 100
4.2. Ингибирование экспрессии гена неомицинфосфотрансферазы II в трансгенных растениях с помощью двуцепочечных РНК 103
4.3. Фенотипические изменения трансгенных растений Nicotiana tabacum L., содержащих антисмысловую форму гена hmgl 113
Глава 5. Создание и исследование трансгенных растений Nicotiana tabacum L., экспрессирующих агробактериальные гены биосинтеза фитогормонов 128
5.1. Физиолого-биохимические особенности растений табака, экспрессирующих агробактериальный ген изопентенилтрансферазы ipt 128
5.2. Получение и анализ трансгенных растений табака, экспрессирующих агробактериальный ген триптофанмонооксигеназы iaaM. 140
5.3. Влияние суперпродукции ауксинов и цитокининов на фотосинтез, рост и развитие трансгенных растений табака 152
5.4. Подавление экпрессии агробактериальных онкогенов в трансгенных растениях с помощью антисмысловых РНК 156
Глава 6. Получение и анализ трансгенньгх растений, экспрессирующих ген поверхностного антигена вируса гепатита В (HBsAg) 163
6.1. Создание и молекулярно-генетический анализ растений Nicotiana tabacum L., содержащих ген HBsAg под контролем одинарного и двойного промоторов 35S РНК вируса мозаики цветной капусты 164
6.2. Получение и анализ растений картофеля Solarium tuberosum L., содержащих ген HBsAg под контролем промоторов CaMV 35SS и
гена пататина ВЗЗ 172
6.3. Выделение и характеристика HBs-антигена, синтезируемого трансгенными растениями табака и картофеля 178
6.4. Тканеспецифическая экспрессия гена HBsAg в клетках трансгенных растений и культуры тканей Nicotiana tabacum L 186
6.5. Получение и анализ безмаркерных растений, экспрессирующих ген поверхностного антигена вируса гепатита В 194
Заключение 200
Выводы 205
Список литературы
