Введение
Глава I. Обзор литературы. Новые методы генетики несовершенных грибов 8
1.1. Введение 8
1.2. Несовершенные грибы как объекты генетических исследований 9
1.3. Биологические особенности и практическое значение несовершенного гриба Aureobasidium pullulans (de Вагу) Arnaud ІЗ
1.3.1. Жизненный цикл гриба A.pullulans ІЗ
1.3.2. Экологические ниши гриба и механизмы устойчивости к экстремальным факторам среды 16
1.3.2.1. A.pullulans - фитопатоген 16
1.3.2.2. A.pullulans - разрушитель полимеров 16
1.3.2.3. Радиоустойчивость гриба І 16
1.3.2.4. Устойчивость гриба к ионам тяжелых металлов 17
1.3.3. A.pullulans , как модель для изучения дрожже-вого-мицелиального диморфизма у грибов 17
1.3.4. A.pullulans - продуцент полисахаридов 19
1.3.5. Гене тико-физи ологические исследования гри ба.. 20
1.4. Протопласты грибов в генетических экспериментах 23
1.4.1. Условия получения и регенерации протопластов грибов 23
1.4.2. Слияние протопластов грибов 28
1.4.3. Внутривидовая гибридизация грибов методом слияния протопластов 32
1.4.4. Межвидовая гибридизация грибов путем слияния протопластов 40
1.4.5. Межродовые слияния протопластов грибов 47
1.4.6. Возможные механизмы стабилизации продуктов слияния протопластов путем генетической рекомбинации 50
1.4.7. Протопласты в опытах по трансформации грибов... 54
1.5. Заключение 56
Глава II. Материалы и методы 57
2.1. Штаммы гриба и мутанты, использованные в работе.. 57
2.2. Условия культивирования 57
2.3. Выделение мутантов 57
2.3.1. УФ-мутагенез и отбор ауксотрофных мутантов ... 57
2.3.2. Химический мутагенез 62
А. Обработка нитрозометилмочевиной (БММ)
Б. Обработка гидроксиламинопурином (ГАП)
2.4. Получение протопластов и условия их регенерации. 62
2.5. Метод слияния протопластов 64
2.6. Генетический анализ первичных и вторичных ПСП... 65
2.6.1. Анализ митотическои стабильности ПСП 65
2.6.2. Анализ индуцированной митотическои сегрегации ПСП 65
2.6.2.1. Индуцирование УФ-излучением 65
2.6.2.2. Индуцирование хлорал-гидратом 66
2.6.2.3. Индуцирование беномилом 66
2.7. Метод окраски ядер в клетках гриба 67
2.8. Определение количества ДБК в клетках гриба методом проточной цитофлуориметрии 67
2.9. Статистическая обработка результатов 67
Глава III. Характеристика исходных штаммов 68
3.1. Морфолого-культуралъные признаки 68
3.2. Устойчивость гриба к ионам Со2+ и Си2* 76
3.3. УСТОЙЧИВОСТЬ штаммов гриба к индукторам гаплоиди-зации 78
3.4. Устойчивость клеток гриба к УФ-излучению 79
3.4.1. Летальное действие УФ-излучения 79
3.4.2. Мутагенное действие УФ-излучения 81
Глава ІV. Протопласты A.pullulans и их слияние 83
4.1. Получение протопластов и их регенерация 83
4.2. Внутри- и межштаммовые слияния протопластов 83
4.3. Слияние протопластов и тест на комплементацию . 88
Глава V. Генетический анализ продуктов слияния протопластов A.pullulans 90
5.1. Генетический анализ первичных ПСП 90
5.2. Генетический анализ вторичных ПСП 94
5.2.1. Генетический анализ нестабильных ПСП 95
5.2.2. Генетический анализ стабильных ПСП 98
5.2.2.1. Характеристика митотической стабильности ПСП.. 102
5.2.2.2. Индуцированная УФ-лучами нестабильность ПСП... 102
5.3. Митотическая нестабильность,индуцированная хлоралгидратом НО
5.4. Митотическая нестабильность, индуцированная бено-милом III
5.5. Сравнение количества ДНК на клетку в ПСП и родительских штаммах 114
Глава VІ. Обсуждение 120
Выводы 134
Использованная литература 135
