Введение
Глава 1. Литературный обзор 14
1.1. Активные формы кислорода и их двойственная роль в организме 14
1.2. Антиоксидантная защита организма 18
1.3. Роль окислительного стресса в патогенезе различных заболеваний 23
1.3.1. Болезни системы кровообращения и сахарный диабет 23
1.3.2. Нарушения репродуктивной функции мужчин 25
1.3.3. Нарушения репродуктивной функции женщин 28
1.4. Мониторинг оксидант/антиоксидантного состояния (окислительного стресса) организма 30
1.4.1. Определение радикальной активности 31
1.4.2. Определение продуктов перекисного окисления макромолекул 33
1.4.3. Оценка антиоксидантной активности 35
1.4.3.1. Методы определения антиоксидантной активности ферментов 36
1.4.3.2. Методы определения суммарной активности неферментативных антиоксидантов 39
1.5. Постановка задачи 48
Глава 2. Экспериментальная часть 49
2.1. Аппаратура 49
2.2. Реактивы 50
2.3. Объекты исследования 51
2.4. Методы исследования 53
2.4.1. Потенциометрический метод определения антиоксидантной активности с использованием медиаторной системы 53
2.4.2. Спектрофотометрический метод определения антиоксидантной активности TAS Randox 55
2.4.3. Гемиглобинцианидный метод определения содержания гемоглобина 2.4.4. Метод определения гематокрита 57
2.4.5, Спермиологический анализ 57
Глава 3. Исследование взаимодействия медиаторной системы с цельной кровью и ее фракциями, семенной и фолликулярной жидкостями и разработка алгоритмов определения АОА этих жидкостей потенциометрическим методом с медиаторной системой 58
3.1. Выбор сенсора 58
3.2. Исследование и анализ крови и ее фракций 60
3.2.1. Исследование растворов индивидуальных антиоксидантов и раствора, моделирующего состав плазмы крови 60
3.2.2. Выбор состава медиаторной системы и условий разбавления пробы 62
3.2.3. Исследование влияния способа подготовки крови и ее фракций на результаты анализа 66
3.2.4. Выделение клеточной составляющей антиоксидантной активности крови и эритроцитарной массы 69
3.3. Исследование и анализ семенной и фолликулярной жидкостей 72
3.3.1. Выбор состава медиаторной системы и условий разбавления пробы72
3.3.2. Выбор фракции и способа подготовки семенной жидкости к анализу 74
3.3.3. Выбор способа подготовки фолликулярной жидкости к анализу 75
3.3.4. Корреляция результатов определения АОА фолликулярной жидкости и сыворотки крови 76
Глава 4. Исследование взаимодействия медиаторной системы с пероксидными радикалами и разработка потенциометрического метода определения антиоксидантной активности с использованием радикального инициатора 2,2-азобис(2-метилпропионамидин) дигидрохлорида (ААРН) 79
4.1. Исследование реакции взаимодействия пероксидных радикалов с восстановленным компонентом медиаторной системы 79
4.2. Разработка метода исследования кинетики генерирования пероксидных радикалов, определение скорости и константы генерирования 83
4.3. Разработка потенциометрического метода определения антиоксидантной активности с использованием реакции генерирования радикалов инициатором ААРН 88
4.4. Определение АОА растворов индивидуальных антиоксидантов потенциометрическим методом с использованием взаимодействия с пероксидными радикалами, генерируемыми ААРН 90
Глава 5. Сравнительные исследования антиоксидантных свойств биологических жидкостей методами, включающим стадию генерирования свободных радикалов и не включающим указанную реакцию. Обоснование использования последнего метода в анализе 94
5.1. Сравнительные определения АОА плазмы крови спектрофотометрическим методом TAS Randox и потенциометрическим методом с медиаторной системой 94
5.2. Определение TRA образцов эритроцитарной массы потенциометрическим методом с медиаторной системой с использованием взаимодействия с радикалами ААРН и без использования радикальных взаимодействий 99
Глава 6. Потенциометрический метод определения антиоксидантной активности в клинических исследованиях 103
6.1. Исследование АОА плазмы крови пациентов с болезнями системы кровообращения и сахарным диабетом II типа 103
6.2. Исследование АОА семенной жидкости при различных видах патологии репродуктивной функции, установление диагностических критериев 109
Выводы 121
Литература 123
