Введение
2. Обзор литературы 7
2.1. Становление представлений о клеточной смерти. Типы клеточной смерти ... 7
2.2. Механизмы ПКС 12
2.2.1. Роль протеаз 14
2.2.2. Роль эндонуклеаз 18
2.2.3. Участие протеинкиназ 19
2.3. АФК и их роль в ПКС 20
2.4. Роль митохондрий в ПКС...—... 28
2.4.1. Митохондрии как АФК-генерирующие системы 28
2.4.2. Митохондрии как поставщики апоптогенных факторов 31
2.5. Хлоропласты как энергопреобразующие и сигналпередающие системы. Косвенные данные об участии хлоропластов в ПКС... 33
2.5.1. Фотосинтетическая электронтранспортная цепь. Общие представления 33
2.5.2. Хлоропласты как АФК-генерирующие системы 37
2.5.3. PQ-зависимые ПК хлоропластов 38
2.5.4. Косвенные данные об участии хлоропластов в ПКС 39
2.6. Акцепторы электронов фотосинтетической ЭТЦ и игибиторы
электронного транспорта... 40
2.7. Модели для изучения ПКС у растений... . 42
3. Экспериментальная часть 43
3.1. Цель и задачи исследования 43
3.2. Объекты и методы исследования... .43
3.2.1. Исходные сорта и мутаны гороха, использованные в работе 43
3.2.2. Проращивание гороха и выделение абаксиального эпидермиса листа... 45
3.2.3. ЭПР-спектроскопия 46
3.2.4. Оксиметрия 48
3.2.5. Спектрофотометрия 48
3.2.6. Кондуктометрия 48
3.2.7. Создание анаэробных условий 49
3.2.8. Приготовление гематоксилина Карацци 49
3.2.9. Инфильтрация реагентов 50
3.2.10. Условия инкубации с реагентами 50
3.2.11. Окрашивание препаратов, микроскопия и получение фотографий 51
3.2.12. Статистическая обработка данных 52
3.2.13. Обоснование экспериментальных подходов, использованных в работе 53
3.3. Результаты исследования..55
3.3.1. Подбор условий инкубации 55
3.3.2. Подбор режима инфильтрации 56
3.3.3. Проверка активности ферментов, используемых для создания ана эробных условий в среде инкубации 57
3.3.4. Кондуктометрические опыты 57
3.3.5. Влияние CN"Ha ядерный аппарат клеток эпидермиса из листьев гороха 58
3.3.6. Влияние освещения на Г-индуцированное разрушение ядер в усть-ичных и эпидермальных клетках из листьев гороха 58
3.3.7. Влияние интенсивности света и его спектрального состава на CN~-HH-дуцированное разрушение ядер в устьичных клетках из листьев гороха 61
3.3.8. Влияние антиоксидантов и анаэробиоза на С>Г-индуцированное разрушение ядер в клетках эпидермиса листьев гороха 64
3.3.9. Действие акцепторов электронов на СЇГ-индуцированное разрушение клеточных ядер 69
3.3.10. Влияние ингибиторов фотосинтетического переноса электронов DCMU, DNP-INT и стигмателлина на С>Г-индуцированное разрушение ядер 73
3.3.11. Действие ингибиторов протеинкиназы С и протеаз 75
3.3.12. CNT-индуцированное разрушение ядер в клетках эпидермиса мутантов гороха 76
3.3.12.1. ЭПР-спекроскопия листьев гороха 76
3.3.12.2. Световая микроскопия устьичных клеток 78
3.3.12.3. Действие DCMU и метилвиологена на СТ^Г-индуцированный апоптоз устьичных клеток 78
3.4. Обсуждение результатов... 83
3.5. Выводы... 91
4. Литература 93
