Введение
1. Применение S.pyogenes для лечения онкологических заболеваний (обзор литературы) .11
1.1 Основные подходы к лечению онкологических заболеваний с помощью ,актерий .11
1.2 Историческое и современное обоснование лечения рака S.pyogenes 16
1.3 S. pyogenes - возбудитель заболеваний человека. Основные факторы патогенности 20
1.3.1 Общая характеристика S. pyogenes 20
1.3.2 Поверхностный М-белок S. pyogenes .22
1.3.3 Основные токсины и ферменты, вырабатываемые S. pyogenes 27
1.4 Возможные механизмы воздействия S. pyogenes на опухолевые клетки .32
1.4.1 Прямое цитотоксическое воздействие S.pyogenes на опухолевые клетки 32
1.4.2 Активация плазминогена 33
1.4.3 Активация иммунной системы .34
1.4.4 Воздействие высокой температуры 36
1.4.5 Ингибирующее действие аргининдеиминазы 37
1.5 Обобщение материала, изложенного в литературном обзоре 38
2. Материалы и методы исследования .41
3. Выбор штамма S.pyogenes для проведения экспериментов и разработка способа введения бактерий животным .51
4. Создание штамма S.pyogenes «Гуров» с блокированной продукцией М-белка и изучение его противоопухолевого действия .72
4.1 Получение штамма S.pyogenes «Гуров» с блокированной продукцией М белка .72
4.1.1 Анализ нуклеотидной последовательности в области гена М-белка .72 4.1.2.Электротрансформация emm гена S. pyogenes штамма «Гуров» методом электропорации .76
4.1.3 Анализ полученных мутантных клонов по характеру локализации ДНК вставки в геноме и по стабильности инсерции в область генома .79
4.1.4 Секвенирование ДНК штамма «Гуров» после трансформации .80
4.2 Результаты полногеномного секвенирования Streptococcus pyogenes штамм «Гуров» и его мутанта по М-белку «Гуров» emm 83
4.3 Сравнение эффективности терапии мышиных перевиваемых опухолей с использованием S. pyogenes штамма «Гуров» и его мутантного штамма, лишенного М-белка в экспериментах in vivo 87
4.4 Изучение жизнеспособности S.pyogenes штаммов «Гуров» и «Гуров» emm– после введение внутрь опухоли 90
4.5 Взаимодействие S. pyogenes штамма «Гуров» и его мутанта по М-белку с клетками гепатомы 22а in vitro
4.5.1 Оценка цитотоксического воздействия штаммов «Гуров» и «Гуров» emm– в отношении гепатомы 22а 93
4.5.2 Оценка адгезии штаммов «Гуров» и «Гуров» emm– в отношении гепатомы 22а .94
4.6 Взаимодействие штамма «Гуров» S. pyogenes и его мутанта по М-белку с перитонеальными макрофагами интактных мышей in vitro .98 4.6.1 Фагоцитарная активность макрофагов в отношении штамма S. pyogenes «Гуров» и его мутанта по М-белку 100
4.6.2 Влияние штамма «Гуров» и его мутанта по М-белку на способность макрофагов продуцировать нитроксидные радикалы in vitro 101
4.6.3 Влияние штамма S.pyogenes «Гуров» и его мутанта по М-белку на способность макрофагов к продукции супероксид анионов in vitro 103
4.6.4 Влияние штамма S.pyogenes «Гуров» и его мутанта по М-белку на способность макрофагов к продукции цитокинов in vitro .105
5. Изучение противоопухолевого действия штамма S.pyogenes М49-16 и его мутанта с инактивированным геном аргининдеиминазы М49-16delAD .109
5.1 Исследование цитотоксического действия штамма S.pyogenes M49-16 и его мутанта по гену аргининдеиминазы M49-16delAD в отношении клеток гепатомы 22а in vitro .110
5.2 Исследование противоопухолевой активности штамма S. pyogenes M49-16 и его мутанта по гену аргининдеиминазы на модели лабораторных животных с саркомой S37 112
Заключение .116
Выводы .126
Список условных сокращений .128
Список литературы .130
