Введение
Глава 1. Обзор литературы 12
1.1 Основные характеристики мезенхимальных стволовых клеток человека и области их применения в клеточной терапии 12
1.2 Роль и место двунитевых разрывов среди повреждений ДНК 18
1.3 Основные механизмы репарации двунитевых разрывов ДНК и их роль в судьбе клетки 19
1.4 Особенности воздействия ионизирующего излучения в малых дозах на мезенхимальные стволовые клетки 26
1.4.1 Репарация двунитевых разрывов ДНК 26
1.4.2 Пролиферация 32
1.4.3 Старение 33
1.4.4 Радиационно-индуцированная нестабильность генома 37
1.4.5 Канцерогенез 39
Глава 2. Материалы и методы 45
2.1 Выделение и культивирование мезенхимальных стволовых клеток слизистой десны 45
2.2 Выделение и культивирование мезенхимальных стволовых клеток костного мозга 46
2.3 Иммунофенотипическая характеристика выделенных мезенхимальных стволовых клеток 47
2.4 Облучение 47
2.5 Иммуноцитохимические исследования 48
2.6 Анализ количества - галактозидаза положительных клеток 49
2.7 Статистический анализ 49
Глава 3. Результаты и обсуждение 51
3.1 Анализ накопления спонтанных двунитевых разрывов ДНК в длительно культивируемых мезенхимальных стволовых клетках человека 51
3.2 Ранние радиационные эффекты 58
3.2.1 Оценка изменений числа и колокализации фокусов H2AX и рATМ в ядрах мезенхимальных стволовых клеток, облученных рентгеновским излучением в малых дозах 58
3.2.2 Сравнительные исследования изменений числа и колокализации фокусов H2AX и рATМ в ядрах мезенхимальных стволовых клеток, облученных в дозах 80 и 1000 мГр 72
3.2.3 Анализ изменения числа фокусов H2AX в пролиферирующих и покоящихся клетках 76
3.3 Отдаленные эффекты облучения 79
3.3.1 Количественный анализ фокусов H2AX в потомстве облученных клеток 79
3.3.2 Оценка пролиферативной активности в потомстве облученных клеток 81
3.3.3 Оценка клеточного старения в потомстве облученных клеток 82
Заключение 85
Выводы 90
Список сокращений 91
Библиографический список 93
Благодарности 122
