Введение
1. Обзор литературы 10
1.1. Протеазы. Классификация, механизм действия и физико-химические свойства 10
1.2. Амилаза. Физико-химические свойства и механизм действия 20
1.3. Продуценты щелочных сериновых протеиназ и термостабильной а-амилазы 24
1.4. Физиологические функции протеаз и а-амилазы 29
1.5. Регуляция биосинтеза протеаз и а-амилазы микроорганизмами... 32
1.6. Методы повышения активности штаммов 39
1.7. Применение щелочных протеиназ, а-амилазы и комплексных препаратов в различных отраслях АПК 42
2. Материалы и методы 47
2.1. Продуцент и условия хранения посевного материала 47
2.2. Методы проведения мутагенеза 48
2.3.1. Первый и третий этапы мутагенеза. Получение стрептомицино-устойчивых штаммов В. licheniformis ST-90 и В. licheniformis 103 48
2.3.2. Второй этап мутагенеза. Получение штамма В.licheniformis К11 ... 50
2.4. Условия культивирования продуцента 50
2.5. Получение ферментных препаратов 52
2.6. Методы определения активности ферментов 52
2.7. Характеристика ферментационных сред 55
3. Получение высокоактивного штамма bacillus licheniformis 103 методами мутагенеза и селекции. оптимизация способа ведения посевного материала мутантного штамма 56
3.1. Мутагенез, селекция 56
3.2. Исследование влияния условий хранения и ведения посевного материала на ферментативную активность мутантного штамма B.licheniformis 103 59
3.2.1. Исследование морфологической изменчивости штамма B.licheniformis 103 при рассеве на разные виды агаризованных сред... 59
3.2.2. Влияние условий хранения посевного материала на ферментативную активность штамма В. licheniformis 103 61
3.2.3. Влияние длительности хранения спорового посевного материала на ферментативную активность штамма B.licheniformis 103 63
3.2.4. Влияние способа длительного хранения спорового посевного материала на ферментативную активность штамма B.licheniformis 103 65
4. Оптимизация условий глубинного культивирования мутантного штамма bacillus licheniformis 103 ... 67
4.1. Оптимизация состава питательных сред для глубинного культивирования продуцента 67
4.1.1. Культивирование исходного и мутантного штаммов на средах с кормовыми дрожжами и различными источниками углерода 67
4.1.2. Выбор оптимального комплексного источника органического азота для глубинного культивирования штамма В. licheniformis 103... 70
4.1.3. Влияние концентрации кукурузной муки на биосинтез ферментов штаммом В. licheniformis 103 72
4.1.4. Культивирование штамма B.licheniformis 103 на ферментационных средах с различным соотношением кукурузной и соевой муки 73
4.1.5. Культивирование штамма B.licheniformis 103 на ферментационных средах с полной и частичной заменой кукурузной муки пшеничной, ржаной и ячменной 75
4.1.6. Влияние неорганических источников фосфора на биосинтез ферментов штаммом B.licheniformis 103 79
4.1.7. Влияние способа ферментативной обработки среды для глубинного культивирования на биосинтез ферментов штаммом В. licheniformis 103 81
4.2. Влияние условий культивирования на синтез ферментов штаммом В. licheniformis 103 82
4.2.1 Влияние температуры культивирования и рН исходной ферментационной среды на биосинтез ферментов штаммом B.licheniformis 103 82
4.2.2. Влияние возраста и количества вегетативного посевного материала на синтез протеазы и а-амилазы штаммом B.licheniformis 103 85
4.3. Направленное культивирование продуцента 87
5. Культивирование штамма bacillus licheniformis 103 с внесением в культуральную жидкость поверхностно-активных веществ 89
5.1. Изучение локализации протеазы 89
5.2. Добавление поверхностно-активных веществ в качестве индукторов биосинтеза протеазы 90
5.3. Культивирование штамма B.licheniformis 103 с внесением в ферментационные среды промышленных поверхностно-активных веществ 92
6. Получение концентрированных ферментных препаратов амилопротолихетермг1 ох и г20х . 94
7. Исследование физико-химических свойств ферментного препарата амилопротолихетерм. 97
7.1. Влияние рН и температуры на протеолитическую и амилолитическую активность препарата Амилопротолихетерм Г20х 97
7.2. Стабильность протеолитических и амилолитических ферментов штамма B.licheniformis 103 при различных значениях рН и температуры 99
7.3. Влияние промышленных поверхностно-активных веществ и щелочных реагентов на протеолитическую и амилолитическую активность препарата Амилопротолихетерм 102
7.3.1. Исследование влияния промышленных поверхностно-активных веществ на протеолитическую и амилолитическую активность препарата Амилопротолихетерм Гх 102
7.3.2. Исследование влияния промышленных поверхностно-активных веществ на стабильность протеолитических ферментов препарата Амилопротолихетерм Г20х 103
7.3.3. Исследование влияния щелочных реагентов на стабильность протеолитических ферментов препарата Амилопротолихетерм Г20х 104
8. Масштабирование процесса культивирования штамма bacilluslicheniformis 103 106
8.1. Культивирование штамма B.licheniformis в лабораторных ферментерах 106
8.2. Культивирование штамма B.licheniformis 103 в полупроизводственных условиях 109
8.3. Культивирование штамма В.licheniformis 103 в условиях МЭЗ 109
9. Испытание препаратов амилопротолихетерм в спиртовой и других отраслях производства 111
Выводы 115
Список литературы 116
Приложения 140
