Введение
Глава I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 11
1.1. Классификация пектолитических ферментов 11
1.1.1 Пектинэстераза высших растений 17
1.1.2 Полигалактуроназа высших растений 19
1.2. Селекция и мутагенез микроорганизмов — 24
продуцентов пектолитических ферментов
1.3. Биосинтез пектолитических ферментов 32
микроорганизмами
1.4. Продуценты пектолитических ферментов 39
1.5. Аспекты практического применения 44
пектолитических ферментов
Глава II. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ 49
2.1. Материалы и методы исследований 49
2.1.1 Объекты исследований 49
2.1.2 Условия хранения посевного материала 49
2.1.3 Культивирование микроорганизмов 50
2.1.4 Влияние начального рН питательной среды 50
2.1.5 Влияние аэрации питательной среды на активность пектолитических ферментов50
2.1.6 Влияние возраста посевного материала 51
2.1.7 Получение концентрированных ферментных препаратов 51
2.2. Методы определения активности ферментов 51
2.2.1 Определение общей пектолитической активности 51
2.2.2 Определение эндо-полигалактуроназной активности 52
2.2.3 Определение пектинэстеразной активности 52
2.2.4 Определение ксиланазной активности 52
2.2.5 Определение целлюлолитической активности 53
2.2.6 Определение (З-Глюканазной активности 53
2.2.7 Определение хитиназной активности 54
2.3 Методы биохимического анализа 54
2.3.1 Определение содержания растворимого белка по 54 методу Лоури
2.3.2 Определение термостабильности 54 пектолитических ферментов
2.3.3 Определение рН-стабильности пектолитических 55 ферментов
2.3.4 Структура исследований 56
Глава III. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЯ 57
3.1. Сравнительная оценка микромицетов, синтезирующих пектолитические ферменты 57
3.1.2 Селекция штамма A.foetidus 37 с целью повышения его биосинтетической способности 59
3.1.2 Подбор условий для поддержания биохимической активности в посевной культуре61
3.2. Разработка ускоренного микробиологического метода отбора активных вариантов 64
3.3. Физиолого - биохимическая характеристика отобранного варианта 66
3.3.1 Оптимизация состава питательной среды для биосинтеза пектолитичеких ферментов методом аддитивно-решетчатого описания объекта 66
3.4. Селекция и мутагенез родительского штамма
A.foetidus 72
3.4.1 Методика по ведению и хранению штамма 5 Aspergillus foetidus 379-K - продуцента пектолитических ферментов 78
3.4.1.1 Морфологическая характеристика продуцента пектолитических ферментов79
3.4.1.2 Описание процесса поддержания продуцента пектолитических ферментов вактивном состоянии80
3.4.1.3 Приготовление суспензии конидий Aspergillus foetidus 379-K 80
3.4.1.4 Рассев суспензии конидий продуцента пектолитических ферментов на агаризованную питательную среду в чашках Петри 81
3.4.1.5 Выращивание колоний микромицета Aspergillus foetidus 379-К в чашках Петри и проверка активности в отобранных колониях 82
3.4.1.6 Рассев активных колоний на косяки с 82 агаризованной питательной средой и определение активности пектолитических ферментов в култьтуре микромицета Aspergillus foetidus 379-K
3.5. Исследование процессов биосинтеза 84
экзопектиназ и состава ферментативного комплекса, продуцируемого грибом A.foetidus 379-К
3.5.1 Влияние начального рН на синтез пектолитических ферментов84
3.5.2 Влияние интенсивности аэрирования на биосинтез пектиназ85
3.5.3 Динамика накопления пектолитических ферментов и изменение рН в процессе роста культуры86
3.6. Получение комплексного ФП Пектофоетидин Г10ХиГ18Х 90
3.6.1 Изучение условий получения ФП 90 Пектофоетидин Г10Х и Г18Х и их биохимичекая характеристика
3.6.2 Изучение фракционного состава ФП 92 Пектофоетидин Г10Х, полученного на основе мутантного штамма Aspergillus foetidus 379-К
3.6.3 Сравнительная характеристика ФППектофоетидин Г10Х и Пектофоетидин П10Х 104
3.6.4. Изучение рН и термостабильности ФП пектиназ 105
3.6.5. Исследование эффективности действия ФП 109 пектиназ на деструкцию клюквенного сырья при получении соков
3.7. Заключение 113
ВЫВОДЫ 114
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 115
ПРИЛОЖЕНИЯ 134
