Введение
2 Обзор литературы 12
2.1 Характеристика возбудителя бешенства 12
2.2 Эпизоотология бешенства и ситуация по бешенству в России и в мире 19
2.3 Патогенез, клинические признаки и патологоанатомические изменения при бешенстве 27
2.4 Лабораторная диагностика 32
2.5 Профилактика и меры борьбы. 37
2.6 Заключение по обзору литературы 39
3 Собственные исследования 41
3.1 Материалы и оборудование 41
3.1.1 Пробы патологического материала. 41
3.1.2 Штаммы вируса бешенства. 41
3.1.3 Происхождение проб головного мозга. 42
3.1.4 Сывороточные стандарты. 42
3.1.5 Нуклеотидные последовательности из базы данных GenBank. 42
3.1.6 Праймеры. 42
3.1.7 Животные. 42
3.1.8 Перевиваемые культуры клеток. 43
3.1.9 Реактивы, буферные смеси и ферменты. 43
3.1.10 Приборы и оборудование. 44
3.1.11 Расходные материалы 45
3.2 Методы исследований. 45
3.2.1 Отбор проб патологического материала 45
3.2.2 Реакция иммунофлуоресценции (РИФ) или метод флуоресцирующих антител (МФА). 46
3.2.3 Выделение вируса бешенства на белых мышах (биологическая проба) 47
3.2.4 Выделение вируса бешенства в культуре клеток. 47
3.2.5 Определение аналитической чувствительности метода выделения вируса бешенства в культуре клеток нейробластомы мыши и на белых мышах 47
3.2.6 Определение инфекционной активности культуральной вирусной суспензии изолятов ВБ 3.2.7 Культивирование и титрование референтного штамма CVS ВБ в культуре клеток 48
3.2.8 Определение вируснейтрализующих антител к вирусу бешенства в сыворотках крови животных в реакции нейтрализации в культуре клеток BHK-21 (FAVN) 48
3.2.9 Определение вируснейтрализующих антител к вирусу бешенства в сыворотках крови диких плотоядных животных в реакции нейтрализации в культуре клеток BHK-21 (RFFIT). 49
3.2.10 Ускоренное определение антирабических вируснейтрализующих антител в сыворотках крови диких плотоядных животных в реакции микронейтрализации 50
3.2.11 Выявление фрагментов генома вируса бешенства в обратно-транскриптазной полимеразной цепной реакции (ОТ-ПЦР) 50
4 Результаты собственных исследований. 53
4.1 Разработка метода выделения ВБ в культуре клеток нейробластомы мыши 53
4.1.1 Определение аналитической чувствительности метода выделения вируса бешенства в культуре клеток нейробластомы мыши и на белых мышах. 58
4.2 Создание коллекции полевых изолятов вируса бешенства путем освежения и наработки на культуре клеток. 61
4.2.1 Освежение и наработка изолятов вируса бешенства в культуре клеток.61
4.2.2 Определение инфекционной активности вируса. 62
4.3 Определение уровней вируснейтрализующих антител к вирусу бешенства в сыворотках крови животных в реакции нейтрализации в культуре клеток BHK-21 (FAVN) 62
4.4 Определение вируснейтрализующих антител к вирусу бешенства в сыворотках крови диких плотоядных животных в реакции нейтрализации в культуре клеток BHK-21 (RFFIT). 67
4.5 Ускоренное определение антирабических вируснейтрализующих антител в сыворотках крови диких плотоядных животных в реакции микронейтрализации 77
4.7 Усовершенствование и оценка аналитической чувствительности метода по выявлению фрагментов генома ВБ в ОТ-ПЦР. 82
4.7.1 Определение аналитической чувствительности по выявлению фрагментов генома вируса бешенства в ОТ-ПЦР 85
4.4 Получение и анализ полных геномов четырех изолятов вируса бешенства 99
4.4.1 Характеристика протеинов изученных изолятов 99
4.4.2 Филогенетические взаимоотношения изученных изолятов. 103
5 Обсуждение 104
6 Заключение 109
7 Практические предложения 110
8 Список сокращений 112
9 Список использованной литературы 113
10 Приложения 126
