Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 6
1.1 Понятие воспроизведённого биотехнологического ЛС (биоаналога). 13
1.2 Определение взаимозаменяемости биотехнологических ЛС. 16
1.3 Законодательное регулирование обращения биотехнологических ЛС 19
1.4 Подходы к оценке фармакокинетики биоаналогов . 21
1.5 Методы количественного определения НМГ в препаратах и биожидкостях. 25
1.6 Свойства и определение эноксапарина натрия 30
Выводы к разделу обзор литературы 32
Глава 2. Материалы и методы 33
2.1 Объекты исследования: 33
2.2 Разработка методики определения анти-Ха и анти-IIa активности эноксапарина
натрия в условиях in vitro. 34
2.2.1 Оборудование 34
2.2.2 Реактивы 35
2.2.3 Приготовление реагентов : 35
2.2.4 Приготовление серии разведений рабочего стандартного образца НМГ. 37
2.2.5 Приготовление серии разведений испытуемого препарата НМГ. 38
2.2.6 Ход анализа при определении анти-Ха активности НМГ. 39
2.2.7 Ход анализа при определении анти-IIа активности НМГ. 41
2.3 Разработка методики определения анти-Ха и анти-IIa активности эноксапарина натрия в условиях in vivo. 43
2.3.1 Биологический этап 43
2.3.1.1 Нормативные ссылки 43
2.3.1.2 Выбор животных 44
2.3.1.3 Описание исследования 44
2.3.1.4 Дозы и подготовка препарата для введения 46
2.3.1.5 Тест-система (животные и уход за ними) 47
2.3.1.6 Забор крови для определения концентрации препаратов эноксапарина натрия 50
2.3.1.7 Статистический анализ 51
2.3.1.8 Документация и архивирование 52
2.3.2. Аналитический этап 52
2.3.2.1 Нормативная документация 52
2.3.2.2 Оборудование 53
2.3.2.3 Реактивы
2.3.2.4 Принцип метода 56
2.3.2.5 Методика определения анти-Ха активности гепарина 58
2.3.2.5.1 Приготовление реагентов 58
2.3.2.5.2 Приготовление плазмы контрольной и плазм калибраторов 58
2.3.2.5.3 Построение и использование калибровочного графика 59
2.3.2.5.4 Проведение анализа 60
2.3.2.6. Методика определения анти-IIа активности гепарина 61
2.3.2.6.1. Приготовление реагентов 61
2.3.2.6.2. Построение и использование калибровочного графика 62
2.3.2.6.3. Проведение анализа 63
2.3.2.6.4. Программное обеспечение 64
Вывод к главе 2 64
Глава 3. Валидация разработанных методик 65
3.1 Специфичность 65
3.2 Линейность 66
ГЛАВА 4 АПРОБАЦИЯ МЕТОДИКИ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИ-Ха и АНТИ-IIa АКТИВНОСТИ ЭНОКСОПАРИНА НАТРИЯ В УСЛОВИЯХ IN VITRO. 78
4.1 Результаты и их обсуждение 78
4.2 Определение анти-Ха активности НМГ. 84
4.3 Определение антиIIа активности НМГ. 86
Выводы к главе 4 88
ГЛАВА 5. Апробация методики определения анти-ха и анти-iia активности эноксопарина натрия в условиях in vivo . 90
5.1 Результаты биологического этапа исследования 90
5.2 Результаты аналитического этапа 92
5.3 Фармакокинетический и статистический этап доклинических фармакокинетических исследований препарата-биоаналога эноксопарина натрия (анти-Ха)
5.3.1 Анализ фармакокинетических параметров 94
5.3.2 Результаты исследования 96
5.4 Фармакокинетический и статистический этап доклинических фармакокинетических исследований препарата-биоаналога эноксопарина натрия (анти-IIа) 104
5.4.1. Анализ аналитических циклов 104
5.4.2. Анализ фармакокинетических параметров 106
5. 4.3. Результаты исследования 107
5.5 Заключение 116
Выводы к главе 5 117
Общие выводы 118
Список литературы
