Введение
Глава 1. Методы получения и культивирования свежеизолированных клеток животных для вирусологических исследований 14
1.1. Ферментативная дезагрегация измельченных кусочков ткани 15
1.2. Перфузионный способ дезагрегации паренхиматозных органов ...17
1.3. Способы выращивания первичных культур клеток 19
Глава 2. Применение линий клеток человека и животных для получения вирусных вакцин 23
2.1. Характеристика линий клеток человека и животных 23
2.2. Способы выращивания перевиваемых линий клеток 34
2.3. Перевиваемые линии клеток - субстраты для получения вирусных вакцин 45
Глава 3. Материалы и методы исследований 52
3.1. Культуры клеток и методы работы с ними 52
3.1.1. Культуры клеток 52
3.1.2. Методы получения первичных культур клеток 53
3.1.3. Пассирование клеток 54
3.1.4. Изучение кинетики роста клеток в культуре 54
3.1.5. Хранение клеток в жидком азоте и восстановление их после криоконсервации 56
3.1.6. Кариологический анализ культур 56
3.1.7. Морфологическое изучение культур клеток 57
3.1.8. Контроль культур клеток на безопасность 58
3.2. Методы вирусологических исследований 59
3.2.1. Вирусы 59
3.2.2. Размножение вакцинных штаммов вирусов полиомиелита, клещевого энцефалита, бешенства, чумы плотоядных в клетках линий 4647 и Vero 60
Глава 4. Разработка способов перфузионной трипсинизации почек и селезенок зеленых мартышек 63
4.1. Перфузионная дезагрегация почек обезьян in situ 64
4.2. Перфузионная дезагрегация почек обезьян in vitro 65
4.3. Перфузионная дезагрегация селезенок обезьян in vitro 73
Заключение по главе 4 76
Глава 5. Создание и аттестация посевных и рабочих банков перевиваемых линий клеток обезьян 77
Заключение по главе 5 92
Глава 6. Экспериментальные разработки по применению линии клеток 4647 для получения противовирусных препаратов 94
6.1. Разработки по созданию вакцины против полиомиелита 94
6.2. Разработки по созданию вакцины против клещевого энцефалита...97
6.3. Разработки по созданию новой вакцины против чумы плотоядных.99
6.4. Культивирование вакцинных штаммов вируса бешенства 103
Заключение по главе 6 105
Глава 7. Разработка технологии выращивания культур клеток и вакцинных штаммов вирусов полиомиелита и клещевого энцефалита на микроносителях в биореакторах 106
7.1. Культивирование клеток линии 4647 в условиях псевдосуспензии 106
7.2. Разработка метода псевдосуспензионного культивирования клеток линии Vero 109
7.3. Применение псевдосуспензионного метода культивирования клеток линии Vero для накопления вакцинных штаммов вирусов 119
7.3.1. Культивирование клеток линии Vero и вакцинных штаммов вируса полиомиелита (штаммы Сэбина типа I, II и III) на микроносителе Цитодекс-1 в биореакторе Celligen Plus 119
7.3.2. Культивирование клеток линии Vero и вируса клещевого энцефалита (штамм Софьин) на микроносителе Цитодекс-1 в спиннерах Techne 123
Заключение по главе 7 129
Обсуждение 130
Выводы 145
Список литературы 148
