Введение
1. Гранулоцитарный колониестимулирующий фактор (Г-КСФ). 12
1.1. Функции, биологическое значение и механизм секреции Г-КСФ 12
1.2. Структура Г-КСФ.. 15
1.3. Применение рчГ-КСФ в медицине .18
2. Полиэтиленгликоли (ПЭГ). 20
2.1. Преимущества, направления и перспективы использования пэгилирования в области создания новых классов биофармацевтических препаратов...20
2.2. Свойства ПЭГ как модифицирующего агента 28
2.3. Виды ПЭГ-реагентов.. 33
2.3.1. Обзор современных ПЭГ-реагентов 33
2.3.2. Линейные пэгилирующие агенты 42
2.3.3. Разветвленные пэгилирующие агенты 45
2.3.4. Сильноразветвленные пэгилирующие агенты .45
2.4. Пэгилированные биофармацевтические препараты .48
2.4.1. Препараты, полученные с помощью неспецифического пэгилирования .48
2.4.2. Препараты, полученные с помощью сайт-направленного (сайт-специфического) пэгилирования 50
3. Пэгилированный гранулоцитарный колониестимулирующий фактор (ПЭГ-Г-КСФ) 52
3.1. Краткое описание препарата ПЭГ-Г-КСФ 52
3.2. Пэгилирование рчГ-КСФ 53
3.3. Доклинические и клинические испытания ПЭГ-Г-КСФ .56
1 1. Оборудование и реактивы .61
2. Методы 62
2.1. Аналитические методы 62
2.2. Препаративные методы 64
3. Математические расчеты 68
Результаты и обсуждение .70
1. Изучение и оптимизация условий проведения конъюгации ПЭГ-Г-КСФ 70
1.1. Введение 70
1.2. Оптимизация условий и масштабирование пэгилирования рчГ-КСФ 70
1.3. Идентификация сайта конъюгации ПЭГ 78
2. Очистка препарата ПЭГ-Г-КСФ 81
2.1. Основные подходы к очистке пэгилированных препаратов .81
2.2. Первичная очистка ренатурированного рчГ-КСФ для получения его пэгилированной формы 82
2.3. Гидрофобная хроматография ПЭГ-Г-КСФ .85
2.3.1. Очистка ПЭГ-Г-КСФ от рчГ-КСФ и ПЭГ-олигомеров 85
2.3.2. Очистка от белков E. coli .91
2.4. Ионообменная хроматография ПЭГ-Г-КСФ 93
2.5. Заключительная стадия очистки ПЭГ-Г-КСФ .99
2.6. Оценка чистоты и активности препарата ПЭГ-Г-КСФ .100
Выводы .106
Благодарности 107
Список использованной литературы .108
