Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 10
1.1 Митоксантрон 10
1.1.1 Химические свойства митоксантрона 10
1.1.2 Механизм действия
1.2 Лекарственная форма митоксантрона и особенности ее применения 14
1.3 Методы анализа митоксантрона гидрохлорида 16
1.3.1 Спектрофотометрия в УФ и видимой области спектра 17
1.4 Липосомальные лекарственные формы в настоящее время 18
1.4.1 Строение липосом 23
1.4.2 Номенклатура липосом 24
1.4.3 Методы получения липосомальных наночастиц 26
1.4.4 Характеристики липосомальных частиц 36
1.4.5 Методы активной загрузки 39
1.5 Модификации липосом. 42
1.5.1 Пролонгирование циркуляции липосом (ССЛ). 42
1.5.2 Присоединение антител (иммунолипосомы). 43
1.6 Липосомальные лекарственные формы веществ антрациклинового ряда 45
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования 49
2.1 Материалы 49
2.2 Оборудование 52
2.3 Методы
2.3.1 Метод получения больших многослойных липосом 55
2.3.2 Метод получения малых однослойных липосом 55
2.3.3 Метод получения липосом с инкапсулированным митоксантроном . 56
2.3.4 Метод получения иммунолипосомальной конструкции митоксантрона 56
2.3.5 Измерение диаметра везикул 57
2.3.6 Получение чистой фракции дисперсии с митоксантроном методом гель– фильтрации 57
2.3.7 Метод стерилизующей фильтрации везикул с митоксантроном 58
2.3.8 Количественное определение инкапсулированного митоксантрона 58
2.3.9 Определение белка, связанного с поверхностью липосом с использованием медного комплекса бицинхониновой кислоты 60
2.3.10 Расчет количества молекул на одну липосому. 61
2.3.11 Метод измерения (дзета) – потенциала липосомальной дисперсии 62
2.3.12 Метод оценки специфического связывания иммунолипосомальной конструкции митоксантрона с клетками–мишенями методом непрямой реакции поверхностной иммунофлуоресценции (РИФ) 63
2.3.13 Проточно–цитофлуориметрический анализ 63
2.3.14 Оценка цитотоксической активности липосомальной формы и иммунолипосомальной конструкции митоксантрона МТТ–тестом in vitro 64
ГЛАВА 3. Разработка состава и технологии получения липосомальной формы митоксантрона 66
3.1 Технология получения липосомальных дисперсий митоксантрона 66
3.1.1 Выбор липидных композиций 67
3.1.2 Получение больших многослойных липосом (МЛВ) 69
3.1.3 Получение малых однослойных липосом (МОЛ) 72
3.1.4 Загрузка препарата
3.2 Количественное определение митоксантрона включенного в липосомы. 81
3.3 Получение иммунолипосомальной конструкции митоксантрона 83
3.3.1 Очистка иммунолипосомального митоксантрона 85
3.4 Спектрофотометрическое определение содержания митоксантрона в
иммунолипосомальной конструкции 87
3.4.1 Определение влияния антител на спектрофотометрические характеристики иммунолипосомального митоксантрона. 87
3.5 Определение количества моноклональных антител, связанных с поверхностью липосом 90
3.6 Лиофилизация липосомального митоксантрона. 91
3.6.1 Подбор криопротекторов для липосомальной формы митоксантрона. 93
3.6.2 Изучение влияния способов замораживания. 95
3.6.3 Изучение влияния процесса сублимации на размер частиц. 97
3.6.4 Влияние продолжительности храненения на характеристики липосомального митоксантрона 98
3.7 Заключение 100
ГЛАВА 4. Исследование липосомальной и иммунолипосомальной лекарственной формы препарата in vitro 103
4.1 Исследование цитотоксической активности липосомальной формы митоксантрона на клетках мишенях 103
4.2 Оценка влияния пустых иммунолипосомальных и липосомальных конструкций на цитотоксичность . 105
4.3 Исследование цитотоксической активности иммунолипосомальной формы
митоксантрона на клетках мишенях. 107
4.4 Заключение 111
Выводы 112
Список сокращений 114
