Введение
1. Обзор литературы 10
1.1. Необходимость создания вакцины для высокоспепифичной иммунотерапии инфекции ВПЧ 10
1.2. Принцип действия вакцины для иммунотерапии заболеваний, ассоциированных с ВПЧ 6, 11, 16и18 типов 14
1.3. Белки Е7 - их структура и функции 15
1.4. Белок HSP-70 -структураи функции 18
1.5. Примеры получения фьюза E7-HSP-70 19
1.6. Производство рекомбинантных белков в S. cerevisiae в промышленных условиях 20
2. Собственные исследования 43
2.1. Материалы и методы исследований 43
2.2. Результаты исследований 49
2.2.1. Разработка процесса культивирования штаммов - продуцентов
гибридных рекомбинантных белков E7(11)-HSP70, E7(6)-HSP70 и Е7(16) HSP70, E7(18)-HSP70 49
2.2.1.1. Описание штаммов-продуцентов 49
2.2.1.2. Обоснование общей стратегии процесса культивирования на основании проведенного анализа
2.2.1.3. Оценка ростовых свойств и продуктивности штаммов-продуцентов. 53
2.2.1.4. Выбор модельного штамма для проведения исследований 57
2.2.1.5. Разработка этапа накопления биомассы 57
2.2.1.6. Этап экспрессии целевого белка з
2.2.1.6.1. Питательная среда иусловия культивирования этапа экспрессии целевого
белка 75
2.2.1.6.2. Выбор оптимального способа индукции и углерод содержащего субстрата... 7 8
2.2.1.6.3. Анализ пр отестир ованных способов инду кции 87
2.2.1.6.4. Оптимизация этапа биосинтеза путем математического моделирования 89
2.2.1.6.5. Апробация двухстадийной подпитки на штаммах-продуцентах SCR-E7(18)-HSP70HSCR-E7(11)-HSP70, SCR-E7(6)-H SP70 114
2.2.2. Разработка способа дезинтеграции 119
2.2.2.1. Выбор состава лизирующего буфера 119
2.2.2.2. Влияние температуры на стабильность целевого продукта 120
2.2.2.3. Выбор соотношения лизирующий буфер - биомасса 122
2.2.2.4. Влияние давления и количества циклов дезинтеграции
2.2.3. Очистка субстанции гибридных рекомбинантных белков 127
2.2.4. Изготовление готовых лекарственных форм терапевтических вакцин против рецидивирующего респираторного папилломатоза, аногенитального кондиломатоза и против рака шейки матки 130
2.2.5. Технологическая схема производства терапевтических вакцин 131
2.2.6. Предвалидапия технологического процесса
1 3. Обсуждение полученных результатов 136
4. Выводы 141
5. Практическое использование полученных результатов.. 142
6. Рекомендации по использованию научных выводов 143
7. Список литературы
