1 Введение 5
2 Обзор литературы 10
2.1 Вирусная геморрагическая болезнь кроликов 10
2.2 Характеристика возбудителя 11
2.3 Эпизоотологические данные 15
2.4 Патогенез и клинические признаки 19
2.5 Патологоанатомическая картина 20
2.6 Лабораторная диагностика 21
2.7 Иммунитет и специфическая профилактика 23
3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
3. 1 Материалы и методы 27
3.1.1 Вирусы 28
3.1.2 ПЦР и секвенирование 28
3.1.3 Система бакуловирусной экспрессии генов 28
3.1.4 Культуры клеток и питательные среды 32
3.1.5 Определение концентрации recVP60 в ИФА 32
3.1.6 Электрофорез в ПААГ 33
3.1.7 Иммуноблоттинг 34
3.1.8 Очистка recVP60-GI.1 и recVP60-GI.2. 35
3.1.9 Определение концентрации общего белка 36
3.1.10 Определение гемагглютинирующей активности recVP60-GI.1 и
recVP60-GI.2
36
3.1.11 Электронная микроскопия 36
3.1.12 Определение антигенной активности recVP60-GI.1 и recVP60-
GI.2
36
3
3.1.13 Определение антигенного родства штаммов двух генотипов вируса ГБК и полученных recVP60-GI.1 и recVP60-GI.2
38
3.1.14 Определение иммуногенной активности recVP60-GI.1 и recVP60-
GI.2
38
3.1.15 Проведение ИФА для выявления специфических антител к вирусу ГБК у кроликов
39
3.1.16 Применение разработанной тест-системы для оценки напряженности поствакцинального иммунитета к вирусу ГБК у кроликов
40
3.1.17 Определение чувствительности и специфичности разработанных
тест-систем.
41
3.1.18 Проведение сэндвич-ИФА для выявления вируса ГБК в патологическом материале и recVP60-GI.1 и recVP60-GI.2 в культуральной жидкости
42
3.1.19 Исследование образцов патологического материала полученного
от павших и больных животных
43
4. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
4.1 Нуклеотидная последовательность генома и филогенетический
анализ штамма «Тула» вируса ГБК
43
4.2 Определение уровня экспрессии recVP60-GI.1 и recVP60-GI.2 45
4.3 Электрофорез и иммуноблоттинг recVP60-GI.1 и recVP60-GI.2 46
4.4 Электронная микроскопия ВПЧ recVP60 49
4.5 Определение антигенной активности recVP60-GI.1 и recVP60-
GI.2
49
4.6 Антигенное родство штаммов двух генотипов вируса ГБК и полученных recVP60-GI.1 и recVP60-GI.2
55
4.7 Определение степени корреляции полученных результатов при
постановке ИФА и РТГА
57
4.8 Определение иммуногенной активности recVP60-GI.1, recVP60- 58
4
GI.2 в отношении вирусов ГБК 1-го и 2-го генотипов
4.9 Разработка сэндвич-ИФА (АТ-ВГБК) на основе recVP60-GI.1 и
recVP60-GI.2 для выявления антител к вирусу ГБК
61
4.10 Определение чвствительности и специфичности разработанного
сэндвич-ИФА на основе recVP60-GI.1 и recVP60-GI.2 для выявления антител к вирусу ГБК
65
4.11 Разработка сэндвич-ИФА (АГ-ВГБК) для выявления recVP60-GI.1
и recVP60- GI.2 в культуральной жидкости и вирусного АГ геморрагической болезни кроликов генотипов GI.1 и GI.2 в патологическом материале
70
5. ОБСУЖДЕНИЕ 75
6. ЗАКЛЮЧЕНИЕ 83
7. ВЫВОДЫ 85
8. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ 86
9. РЕКОМЕНДАЦИИ И ПЕРСПЕКТИВЫ ДАЛЬНЕЙШЕЙ РАЗРАБОТКИ ТЕМЫ
86
10. СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ 87
11 СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ 89
12. ПРИЛОЖЕНИЯ 113
