Введение
Глава 1. Обзор литературы
1.1. Краткая характеристика возбудителя 12
1.2. Методы лабораторной диагностики и мониторинга природных очагов крымской геморрагической лихорадки 21
Глава 2. Собственные исследования материалы и методы 33
2.1. Вирусные штаммы, используемые в работе 33
2.2. Сбор, учет, хранение и доставка полевого материала 33
2.2.1. Сбор доставка и хранение проб клещей 33
2.3. Сбор, обработка и хранение сывороток крови людей 34
2.4. Исследование материала методом ИФА 35
2.4.1. Подготовка проб для исследований 35
2.4.2. ИФА на выявление вирусных антигенов 35
2.5. Исследование материала с помощью полимеразной цепной реакции 36
2.5.1. Подготовка проб для исследований 36
2.5.2. Проведение ПЦР 37
2.5.3. Получение рекомбинантного положительного контрольного образца 42
2.6. Методы статистической обработки результатов 46
Глава 3. Создание и совершенствование тест-системы для выявления рнк вируса крымской-конго геморрагической лихорадки методом ОТ-ПЦР 47
3.1. Выбор олигонуклеотидных праймеров на основе анализа генома вируса Крымской-Конго геморрагической лихорадки
3.2. Разработка оптимальных условий ПЦР
3.3. Разработка схемы подготовки проб для ОТ-ПЦР
3.4. Создание положительного контрольного образца
3.5. Характеристика тест-системы для выявления РНК вируса Крымской-Конго геморрагической лихорадки методом обратной транскрипции и полимеразнои цепной реакции 57
Глава 4. Определение диагностической ценности тест-системы для выявления рнк вируса ккгл методом обратной транскрипции и полимеразнои цепной реакции 62
4.1. Программа комиссионных испытаний 63
4.2. Лабораторных контроль серий препарата и исследование вирусных штаммов и материала, искусственно инфицированного вирусом ККГЛ 64
4.3. Обследование полевого материала 69
4.4. Исследование сывороток крови больных КГЛ 69
4.5. Оценка тест-системы для выявления РНК вируса ККГЛ методом ОТ-ПЦР 73
Глава 5. Применение разработанной тест-системы для выявления рнк вируса ккгл методом от-пцр при мониторинге природных очагов КГЛ 75
5.1. Апробация тест-системы в ходе мониторинга природных очагов КГЛ 75
5.2. Использование тест-системы для изучения циркуляции вируса ККГЛ 19
Заключение 84
Выводы 88
Список использованной литературы 89
