Введение
Глава 1. Структура и некоторые физико-химические свойства белковых макромолекул 15
1.1 Структура, некоторые физико-химические и спектральные свойства простых белков и апобелковой составляющей сложных белков 16
1.2 Структура, электронные, магнитные и спектральные свойства простетической группы гемопротеидов 31
Экспериментальная часть 37
Глава 2. Объекты и методы исследования 37
2.1 Объекты исследования 37
2.2 Методы исследования
2.2.1 Забор, транспортировка и хранение образцов крови 38
2.2.2 Получение фракции отмытых эритроцитов 39
2.2.3 Получение растворов гемоглобина 40
2.2.4 Получение производных гемоглобина
2.2.4.1 Получение растворов оксигемоглобина 41
2.2.4.2 Получение растворов дезоксигемоглобина 41
2.2.4.3 Получение растворов карбоксигемоглобина 42
2.2.4.4 Получение растворов метгемоглобина
2.2.5 Получение растворов цианметгемоглобина 43
2.2.6 Получение растворов фетального гемоглобина 44
2.2.7 Реактивы: класс чистоты 44
2.2.8 Регистрация спектров поглощения: спектрофотометры и протокол измерения 45 2.2.9 Подходы, направленные на снижение фотометрических ошибок и увеличение разрешения в спектрах поглощения 46
2.2.10 Расчет концентрации гемоглобина 55
2.2.11 Коррекция молярных спектров поглощения производных гемоглобина на присутствие неосновных компонент
2.2.11.1 Коррекция молярных спектров поглощения метгемоглобина A 58
2.2.11.2 Коррекция молярных спектров поглощения дезоксигемоглобина A 61
2.2.11.3 Коррекция молярных спектров поглощения карбоксигемоглобина A 64
2.2.11.4 Коррекция молярных спектров поглощения оксигемоглобина A 66
2.2.11.5 Коррекция молярных спектров поглощения оксигемоглобина F 67
2.2.12 Усреднение молярных показателей поглощения в спектрах производных гемоглобина 70
Глава 3. Разрешение и идентификация перекрывающихся полос поглощения хромофоров белков в диапазоне длин волн 240–320 НМ 71
3.1 Разрешение полос поглощения в спектрах белков с помощью второй производной 71
3.2 Соотнесение полос поглощения в спектрах белков к полосам поглощения в спектрах аддитивных моделей 91
3.3 Идентификация полос поглощения в спектрах белков путем их сопоставления в системе «аддитивная модель апобелка–свободные аминокислоты» 101
Глава 4. Разложение уф-спектров поглощения хромопротеидов на спектры светопоглощения простетических групп и апобелка с помощью аддитивной модели 116
4.1 Разработка способа разложения УФ-спектров поглощения хромопротеидов на составляющие светопоглощения апобелковой и небелковой компонент 116
4.2 Разложение УФ-спектров светопоглощения производных гемоглобина на составляющие поглощения апобелка и простетических групп 136
Глава 5. Анализ УФ-спектров поглощения апобелковой и гемовой компонент некоторых производных гемоглобина в составе макромолекулы 161
5.1 Сравнительный анализ УФ-спектров поглощения апобелковой составляющей окси-, карбокси-, дезокси- и метгемоглобина 161
5.2 Исследование УФ-спектров поглощения простетических групп
окси-, карбокси-, дезокси- и метгемоглобина 176
Заключение 192
Выводы 200
Список литературы
