Введение
1. Обзор литературы 11
1.1 Рак яичников 11
1.1.1 Эпителиальный рак яичников 11
1.1.2 Серозные карциномы яичников 13
1.1.3 Эпидемиология эпителиального рака яичников 14
1.1.4 Лечение эпителиального рака яичников 16
1.2. Гистонметилтрансфераза EZH2 18
1.2.1 Модификация гистонов при раке яичников 18
1.2.2 Гистонметилтрансфераза EZH2 и белки группы поликомб 18
1.2.3 Строение и характеристика EZH2 19
1.2.4 Роль EZH2 в онкогенезе 21
1.2.5 EZH2 и рак яичников 22
1.2.6 Регуляция EZH2 22
1.2.7 Мишени EZH2 в раковых клетках 24
1.2.8 Потенциальные анти-EZH2 противоопухолевые препараты
1.3 Противоопухолевое действие РНКазы Bacillus pumilus 27
1.4 Свойства и функции фактора NF-Y 28
2. Материалы и методы исследований 30
2.1. Материалы 30
2.1.1. Реактивы 30
2.1.2. Ингибитор активности EZH2
2.1.3 Биназа Bacillus pumilus 32
2.2.3 Клеточные линии 32
2.1.3 Ксенографты 32
2.1.4 Базы данных 33
2.2. Методы 33
2.2.1 Иммуногистохимимический анализ 33
2.2.2 Количественная ПЦР 34
2.2.3 Иммуноблоттинг 34
2.2.4 Люциферазный репортерный анализ промотера 35
2.2.5 Иммунопреципитация хроматина (ChIP) 36
2.2.6 Индуцируемая гиперэкспрессия, малые шпильковые РНК, продукция лентивируса и ретровируса 37
2.2.7 Рост колоний в полужидкой агарозной среде 37
2.2.8 Определение апоптоза методом Guava Nexin 38
2.2.9 Миграция и инвазивность клеток
2.2.10 Цитометрический анализ популяций клеточного цикла и культивирование клеток в матригеле в трехмерных условиях 39
2.2.11 Статистический анализ 39
3. Результаты исследований 41
3.1 EZH2 регулируется на транскрипционном уровне в клетках ЭРЯ человека 41
3.2 NF-YA высоко экспрессирован в клетках ЭРЯ человека и индуцирует экспрессию EZH2 44
3.3 Экспрессия NF-YA положительно коррелирует с экспрессией EZH2 в клетках ЭРЯ человека и прогнозирует более короткую выживаемость у пациентов 46
3.4 NF-YA связывается с проксимальной частью промотора EZH2 в клетках ЭРЯ человека 48
3.5 Нокдаун NF-YA подавляет экспрессию EZH2 и ингибирует рост клеток ЭРЯ человека in vitro и в ксенографтах 50
3.6 Нокдаун NF-YA вызывает апоптоз клеток ЭРЯ человека 54
3.7 Ингибирование активности EZH2 в клетках ЭРЯ не подавляет их пролиферацию в двумерных условиях роста 57
3.8 Ингибирование активности EZH2 в клетках ЭРЯ подавляет их пролиферацию в трехмерных условиях роста 60
3.9 Ингибитор активности EZH2 подавляет инвазивность клеток ЭРЯ человека 62
3.10 Ингибитор активности EZH2 вызывает апоптоз в клетках ЭРЯ в трехмерных,
но не в двумерных условиях роста 64
3.11 Биназа подавляет жизнеспособность клеток ЭРЯ 67
3.12 Биназа индуцирует апоптоз в клетках ЭРЯ и не влияет на экспрессию EZH
4. Обсуждение Результатов 70
4.1 Регуляция экспрессии EZH2 в клетках ЭРЯ 70
4.2 Ингибирование активности EZH2 в 2D и 3D условиях 71
4.3 Цитотоксическое действие биназы на клетки ЭРЯ 73
Заключение 75
Список сокращений 77
Список литературы
