Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 11
1.1. Морфогенетическое движение клеток в эмбриогенезе: механизмы и генетический контроль 11
1.1.1. Стадии эмбрионального развития дрозофилы 12
1.1.2. Формирование вентральной борозды 14
1.1.3. Удлинение и сокращение зародышевой полоски 17
1.1.4. Спинное закрытие 21
1.1.5. Развитие трахеи 27
1.1.6. Роль поляризации эпителиальных клеток в морфогенетическом движении 27
1.1.7. Гены, определяющие план строения организма вдоль передне-задний оси, 35
контролируют поляризованное поведение клетки 35
1.2. Происхождение асимметрии: ранняя поляризация 37
1.2.1. Ранний оогенез у дрозофилы 37
1.2.2. Формирование поляризованной цисты 40
1.2.3. Следствие полярности фьюсомы: разные пути детерминации трофоцитов 43
и ооцита 43
1.2.4. Ранняя поляризация ооцита 49
1.2.5. Ориентация ооцита является связующим звеном между ранней и поздней поляризацией яйцевой камеры 53
1.3. Фактор базовой транскрипции trf2 56
Глава 2. Материалы и методы 61
2.1. Культивирование drosophila melanogaster 61
2.2. Линии и мутации drosophila melanogaster, использованные в работе 61
2.3. Генетические методы 64
2.4. Определение температурочувствительного периода 76
2.5. Анализ поведенческих реакций 76
2.6. Биохимические методы 78
2.7. Приготовление препаратов для микроскопии 90
Глава 3. Результаты и обсуждение 97
3.1. Определение температурочувствительного периода мутации lawcp1 98
3.2. Генетический анализ мутации lawcp1 в комбинациях с различными аллелями генов комплекса achaete-scute, генов cut, serrate и delta 107
3.3. Исследование рецепторной чувствительности у мутантов lawcp1 117
3.3.1. Исследование вкусовой чувствительности у гомеозисных мутантов lawcp1 117
3.3.2. Исследование ольфакторной чувствительности у гомеозисных lawc-мутантов 119
3.3.3. Исследование иннервации гомеозисных органов и ног у lawc-мутантов
3.4. Влияние мутации lawcp1 на взаимодействие генов white И zeste 123
3.5. Картирование мутации lawcр1 128
3.6. Использование генетической системы химерного белка p-ph для репрессии транскрипции гена-мишени 130
3.7. Молекулярное клонирование района lawc 133
3.8. Изучение экспрессии и определение нуклеотидной последовательности района lawcр1 134
3.9. Получение и краткая характеристика видимых lawc-аллелей
3.10. Мутация lawcp1 нарушает экспрессию фактора базовой транскрипции trf2 138
3.11. Trf2 контролирует экспрессию гена spineless 140
3.12. Поиск межгенных взаимодействий при помощи делеционного картирования 141
3.13. Нарушения в репродуктивной системе самцов lawcp1e(y)1u1/y 155
3.14. Анализ музейных летальных lawc-мутаций 162
3.15. Получение и изучение новых летальных lawc-АЛЛЕЛЕЙ
3.15.1. Результаты мутагенеза 168
3.15.2. Установление генотипа полученных леталей 169
3.15.3. Дупликационное картирование 170
3.15.4. Молекулярная природа полученных мутаций 173
3.15.5. Получение и анализ реинверсий и спонтанных мутаций 180
3.15.6. Rescue-анализ лабораторных летальных аллелей 182
3.15.7. Поиск точечных мутаций в районе ОРС гена Trf2 184
3.16. Исследование роли trf2 в формировании хромоцентра и компактизации хромосом 186
3.16.1 Исследование причин нерасхождения хромосом у lawc-мутантов в оогенезе 187
3.16.2. TRF2 участвует в формировании прицентромерного гетерохроматина 189
3.16.3. Эффект подавления экспрессии гена Trf2 на компактизацию политенных хромосом в соматических тканях D. melanogaster 190
3.17. Роль изоформ trf2 в эмбриогенезе d. melanogaster 195
3.17.1. Определение стадии летальности lawc-мутантов 195
3.17.2. Анализ препаратов кутикулы погибших эмбрионов из линий с мутациями, нарушающими экспрессию укороченной изоформы белка TRF2 196
3.17.3. Анализ препаратов кутикулы погибших эмбрионов из линий с мутациями, нарушающими экспрессию полноразмерной изоформы белка TRF2 202
3.17.4. Анализ препаратов кутикулы погибших эмбрионов линии с мутацией, нарушающей экспрессию N-концевого домена белка TRF2
3.18. Исследование материнского эффекта trf2 207
3.19. Роль trf2 в оогенезе
3.19.1. Анализ репродуктивной системы слабофертильных и стерильных самок 209
3.19.2. Клональный анализ летальных lawc-аллелей в репродуктивной системе мозаичных самок 214
3.20. Анализ картины экспрессии гена trf2 221
Глава 4. Заключение 223
Выводы 227
Список цитированной литературы 228
