Введение
Глава 1. Обзор литературы 10
1.1. Ионный гомеостаз и ионный гетерогенитет эукариотической клетки 10
1.2. Системы активного ионного транспорта, сопряженного с гидролизом АТФ 11
1.3. Системы вторичного активного транспорта 12
1.4. Na+,K+ -АТФазная транспортная система 13
1.4.1. Структура натриевого насоса 13
1.4.2. Принципы функционирования Na+,K+-АТФазы и ее роль в клетке 16
1.5. Регуляция активности Na+,K+-АТФазы 18
1.5.1. Механизмы кратковременной регуляции 19
1.5.2. Механизмы долговременной регуляции 28
1.6. Изменение транспорта ионов и их роль в запуске пролиферативного ответа лимфоцитов человека. Значение Na+,K+- АТФазы в процессах пролиферации и трансдукции сигнала в клетках разного типа 32
1.7. Особенности пролиферативного ответа нормальных лимфоцитов человека 43
1.7.1. Активация Т-клеточного рецептора 44
1.7.2. Активация рецептора ИЛ-2 и запуск Jak/STAT- сигнального пути 47
Глава 2. Материалы и методы исследования 53
2.1. Выделение и культивирование лимфоцитов периферической крови человека 53
2.2. Схемы активации лимфоцитов 53
2.3. Обработка клеток ингибиторами 54
2.4. Культивирование клеток постоянных клеточных линий 54
2.5. Получение тотальных клеточных лизатов и лизатов мембранных фракций 55
2.6. Антитела
2.7. Электрофорез и иммуноблотинг 57
2.8. Измерение входных потоков рубидия 58
2.9. Оценка пролиферативного ответа лимфоцитов 59
2.10. Оценка экспрессии высокоаффинного рецептора ИЛ-2...59
Глава 3. Результаты исследования 60
3.1. Изменение входных потоков рубидия при переходе нормальных лимфоцитов периферической крови человека, стимулированных митогенами, из состояния покоя к пролиферации.61
3.2. Внутриклеточное содержание натрия и уровень входных потоков рубидия в активированных лимфоцитах 62
3.3. Динамика экспрессии а 1-субъединицы Ка+,К+-АТФазы по ходу пролиферативного ответа ФГА-стимулированных лимфоцитов 64
3.4. Динамика экспрессии а 1-субъединицы №+,К+-АТФазы по ходу пролиферативного ответа лимфоцитов, стимулированных форболовым эфиром и иономицином 69
3.5. Влияние ингибиторов транскрипции и трансляции на экспрессию Na+,K+-ATOa3bi 72
3.6. Экспрессия а 1-субъединицы Na+,K+-ATOa3bi в активированных лимфоцитах является циклоспорин А - зависимым процессом 74
3.7. Экспрессия а 1-субъединицы Na ,К -АТФазы лимфоцитов при стимуляции экзогенным ИЛ-2 77
3.8. В долговременной регуляции экспрессии и функциональной активности Na+,K+-АТФазы участвуют JAK/STAT и МАР-киназные пути 82
Глава 4. Обсуждение результатов 93
Глав а 5. Выводы 106
