СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ ...................................................................................... 5
ВВЕДЕНИЕ................................................................................................................ 7
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ ....................................................................... .16
1.1 Общая характеристика динофлагеллят .................................................... ....16
1.2 Филогенетическое положение динофлагеллят ............................................ 19
1.3 Особенности клеточной организации динофлагеллят ................................ 20
1.3.1 Клеточные покровы ................................................................................. 20
1.3.2 Цитоскелет ................................................................................................ 22
1.3.3 Цитоплазматические органеллы ............................................................ 24
1.3.4 Ядро и структура хромосом .................................................................... 31
1.4 Митоз, клеточный цикл и его регуляция ...................................................... 33
1.5 Жизненный цикл динофлагеллят .................................................................. 36
1.5.1 Разнообразие жизненных циклов ........................................................... 36
1.5.2 Регуляция жизненных циклов ................................................................ 38
1.5.3 Роль экдизиса в жизненном цикле ......................................................... 39
1.6 Поглощение, транспорт, ассимиляция и дефицит азота у динофлагеллят43
1.7 Поглощение, транспорт, ассимиляция и дефицит фосфора у динофлагеллят
................................................................................................................................. 45
1.8 Объект исследования: динофлагелляты Prorocentrum cordatum ............... 49
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ................................................................ 54
2.1 Культуры клеток ............................................................................................. 54
2.2 Схемы опытов по изучению влияния дефицита азота и/или фосфора на
клеточный и жизненный циклы P. cordatum ..................................................... 55
2.3 Измерение концентрации нитрата и фосфата .............................................. 56
2.4 Проточная цитометрия ................................................................................... 57
2.5 Количественная цитометрия изображений .................................................. 58
2.6 Анализ транскриптомов P. cordatum из доступных баз данных ............... 60
2.7 Анализ транскриптома P. cordatum при дефиците фосфора в среде ........ 61
2.7.1 Выделение РНК ........................................................................................ 61
2.7.2 Сборка последовательностей .................................................................. 62
2.7.3 Анализ дифференциально экспрессируемых генов ............................. 62
2.8 Методы изучения временных цист и эксцистирования P. cordatum ........ 63
2.9 Электрофорез в полиакриламидном геле и иммуноблоттинг .................... 65
2.10 Статистический анализ ................................................................................ 67
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ...................................................................................... 68
3.1 Влияние фотопериода на клеточный цикл P. cordatum .............................. 68
3.2 Поглощение ионов нитрата и фосфата в процессе роста культуры .......... 69
3.3 Влияние дефицита азота и фосфора на клеточный и жизненный циклы P.
cordatum ................................................................................................................. 71
3.4 Белки, участвующие в поглощении фосфатов, выявленные с помощью
транскриптомного анализа .................................................................................. 80
3.5 Исследование транскриптома P. cordatum штамма CCAP1136/16 при
дефиците фосфата ................................................................................................. 88
3.6 Влияние температуры на жизненный цикл P. cordatum ............................. 91
3.7 Роль цитоскелета в экдизисе ......................................................................... 93
ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ .................................................................................... 98
4.1 Регуляция клеточного цикла P. cordatum ..................................................... 98
4.2 Регуляция жизненного цикла P. cordatum.................................................. 100
4.3 Поиск гомологов, ответственных за транспорт и ассимиляцию фосфата105
4.4 Временные цисты динофлагеллят ............................................................... 110
4.5 Цитоскелет ..................................................................................................... 111
4.6 Основные факторы регуляции жизненного цикла P. cordatum ............... 113
ВЫВОДЫ ............................................................................................................... 115
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ .................................................................................... 117
БЛАГОДАРНОСТИ .............................................................................................. 147
ПРИЛОЖЕНИЕ ..................................................................................................... 148
