Список сокращений.................................................................................................................... 5
Введение ...................................................................................................................................... 7
Актуальность проблемы ........................................................................................................ 7
Цель исследования ................................................................................................................. 8
Задачи исследования .............................................................................................................. 8
Научная новизна ..................................................................................................................... 8
Теоретическая и практическая значимость.......................................................................... 9
Положения, выносимые на защиту..................................................................................... 10
Апробация работы................................................................................................................ 10
Связь работы с научными программами............................................................................ 11
Структура и объем диссертации ......................................................................................... 11
1. Обзор литературы................................................................................................................. 12
1.1. Мультипотентные мезенхимные стромальные клетки.............................................. 12
1.1.1. Дифференцировка мультипотентных мезенхимных стромальных клеток....... 14
1.1.2. Секреторная активность МСК............................................................................... 18
1.2. Гетерогенность мультипотентных стромальных клеток ........................................... 19
1.3. Нейрогуморальная регуляция функциональной активности МСК .......................... 22
1.4. Регуляция рецепторной чувствительности МСК ....................................................... 28
1.5. Регуляция артериального давления ............................................................................. 33
1.6. Механизмы развития артериальной гипертензии при ожирении ............................. 40
1.7. МСК в регенеративной медицине................................................................................ 42
2. Материалы и методы.......................................................................................................... 48
2.1. Иммуногистохимический анализ экспрессии α1А-адренорецепторов в жировой
ткани ...................................................................................................................................... 48
2.2. Выделение первичной культуры МСК....................................................................... 49
2.3. Культивирование первичной культуры МСК............................................................ 50
2.4. Ca2+
-сигнализация......................................................................................................... 51
2.5. Подготовка библиотек для анализа транскриптома одиночных клеток ................. 53
2.6. Биоинформатический анализ транскриптома одиночных клеток ........................... 54
2.7. Контракция МСК-коллагеновых дисков.................................................................... 55
2.8. Иммунофлуоресцентный анализ локализации ПКА в одиночных клетках ........... 56
2.9. Вестерн-блоттинг.......................................................................................................... 57
2.10. ПЦР в реальном времени ......................................................................................... 59
2.11. CRISPR/Cas-опосредованный нокаут ADRB2 и ADRB3 в клетках ASC52telo ... 60
2.12. Статистический анализ ............................................................................................ 62
3. Результаты............................................................................................................................. 63
3.1. Регуляция чувствительности МСК к норадреналину ................................................ 63
3.2. Активация β3-адренорецепторов приводила к сенситизации МСК за счет
повышения уровня α1А-адренорецептора ......................................................................... 65
3.3. Анализ сигнальных каскадов β3-адренорецепторов, ответственных за повышение
уровня α1А-адренорецепторов............................................................................................ 69
3.4. Анализ транскриптома одиночных клеток при воздействии норадреналина после
индуцированной сенситизации МСК ................................................................................. 73
3.5. Действие норадреналина на сенситизированные МСК приводило к усилению
контракции МСК-коллагеновых дисков ............................................................................ 85
3.6. Анализ распределения α1-адренорецепторов в сосудах жировой ткани................. 86
3.7. МСК пациентов с ожирением, не страдающих артериальной гипертензией, не
способны к норадреналин-зависимой сенситизации ........................................................ 87
3.8. Анализ распределения α1А-адренорецепторов в жировой ткани пациентов с
ожирением, страдающих и не страдающих артериальной гипертензией....................... 90
4. Обсуждение........................................................................................................................... 92
5. Выводы .................................................................................................................................. 97
6. Список литературы............................................................................................................... 98
7. Научные статьи по теме диссертации, опубликованные в журналах SCOPUS, WOS,
RSCI ......................................................................................................................................... 117
