Введение
1. Механизмы регуляции биосинтеза бактериальных ферментов на уровне
транскрипции 15
1.1. Роль структуры промоторов в регуляции экспрессии генов и сигма-факторы бактериальной клетки 15
1.2. Механизмы позитивной регуляции экспрессии бактериальных генов на уровне транскрипции 24
2. Механизмы ответа бактериальных клеток на стресс 50
2.1. Белки ответа на стресс у грамотрицательных бактерий на примере E.coli 51
2.2. Белки ответа на стресс у грамположительных бактерий на примере В. subtil is 55
2.3. Осмоадаптация бактерий. Специфическая и неспецифическая реакция на повышенные концентрации соли в среде обитания 57
2.4. Адаптивный мутагенез и SOS-ответ клеток 62
3. Структура, функции и регуляция биосинтеза некоторых секретируемых гидролитических ферментов бактерий 67
3.1. Хитиназы 67
3.2. Рибонуклеазы 78
3.3. Протеазы 89
ЗАКЛЮЧЕНИЕ ПО ОБЗОРУ ЛИТЕРАТУРЫ 103
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ 105
1. Материалы и методы исследований 105
2. Результаты исследований 123
2.1. Хитинолитический комплекс Serratia marcescens и особенности его биосинтеза 123
2.1.1.Влияние хитина и индуктора SOS-функций клетки на биосинтез ферментов хитинолитического комплекса S. marcescens 123
2.1.2.Характеристика мутантного штамма S.marcescens с повышенной хитиназной активностью 125
2.1.3.Синтез эндохитиназы исходным и мутантным штаммами S.marcescens при культивировании на средах с митомицином С и без него 128
2.1 АОбщая хитиназная активность в процессе роста исходного и мутантного штаммов S.marcescens 131
2.1.5.Состав внеклеточных белков с хитиназной активностью исходного и мутантного штаммов 137
2.1.6.Анализ нуклеотидных последовательностей промоторных участков генов различных хитиназ S.marcescens 140
2Л ,7.Получение частично очищенных хитиназ путем аффинной сорбции на хитине 142
2.1.8.Разделение хитиназ частично очищенного препарата путем изоэлектрического фокусирования 142
2.1.9.Фунгистатическая активность хитиназ S.marcescens 147
2.2. Регуляция биосинтеза внеклеточных рибонуклеаз различных видов бацилл 149
2.2.1.Сравнительный анализ нуклеотидных последовательностей полных генов барназы, биназы и РНКазы Вр 149
2.2.2.Сравнительное изучение синтеза РНКаз в процессе роста В.intermedins, B.pumilus и B.amyloliquefaciens 153
2.2.3.Исследование влияния неорганического фосфата на синтез РНКаз В.intermedins, B.pumilus, B.amyloliquefaciens 157
2.2.4.Изучение закономерностей роста рекомбинантных штаммов E.coli и накопления РНКаз в культуральной жидкости этих штаммов 162
2.2.5.Исследование экспрессии генов РНКаз В.intermedins, B.pumilus и В. amyloliquefaciens в рекомбинантных штаммах Е. coli 165
2.2.6.Биосинтез РНКаз В.intermedins, B.pumilus и B.amyloliquefaciens в присутствии актиномицина Д 170
2.3. Регуляция биосинтеза глутамилэндопептидазы В. intermedins 176
2.3.1 .Особенности биосинтеза глутамилэндопептидазы В. intermedins 176
2.3.2.Экспрессия гена глутамилэндопептидазы B.intermedius в рекомбинантных штаммах B.subtilis 190
2.3.3.Анализ нуклеотидной последовательности промоторного участка гена глутамилэндопептидазы В. intermedins 198
2.3 АБиосинтез глутамилэндопептидазы B.intermedius в условиях стресса.202
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ 214
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 255
ВЫВОДЫ 258
ЛИТЕРАТУРА 260
