Введение
Глава 1. Обзор литературы. 12
1.1. Cемейство белков агути как часть меланокортиновой системы .12
1.1.1. Общая характеристика белка агути .12
1.1.2. Общая характеристика AGRP .13
1.1.3. Экспрессия МКР3 и МКР4 в мозге млекопитающих 18
1.2. Общая характеристика катехоламинергической систем 20
1.2.1. Биосинтез катехоламинов в мозге .20
1.2.2. Регуляция синтеза тирозингидроксилазы 21
1.2.3. Локализация дофаминергических и норадренергических нейронов в мозге млекопитающих 24
1.2.3.1. Локализация дофаминергических нейронов .25
1.2.3.2. Локализация норадренергических нейронов .26
1.2.3.3. Дисфункции катехоламинергических нейронов 27
1.2.4. Рецепторы катехоламинов .28
1.2.4.1. Рецепторы дофамина 28
1.2.4.3. Рецепторы норадреналина .30
1.3. Вазопрессинергическая система гипоталамуса млекопитающих 32
1.3.1. Общая характеристика .32
1.3.2. Катехоламинергическая регуляция вазопрессинергических нейронов гипоталамуса 34
Глава 2. Материалы и методы 38
2.1. Экспериментальные животные и экспериментальные модели .38
2.1.1. Модели in vitro 38
2.1.1.1. Инкубация переживающих срезов мозга мыши С57Bl/6J в среде с AGRP 83-132 или AGRP 25-51 38
2.1.1.2. Инкубация переживающих срезов мозга мыши в среде с неселективным блокатором МКР3 и МКР4 (SHU 9119) и AGRP 83-132 39
2.1.2. Модели in vivo .39
2.1.2.1. Депривация сна 39
2.1.2.2. Тест открытое поле 40
2.1.2.3. Иммобилизационный стресс 40
2.1.2.4. Введение белков в структуры мозга с помощью стереотаксиса 40
2.1.2.5. Мыши Agouti yellow (Ay/а) при ожирении 41
2.1.2.6. Моделирование дефицита катехоламинов с помощью
введения -метил-паратирозина и SCH 39166 41
2.1.2.7. Модель дисбаланса дофамина
(крысы линии Крушинского-Молодкиной) .42
2.2. Обработка материала 43
2.3. Иммуногистохимические методы
2.3.1. Биотин-стрептавидиновый метод 45
2.3.2. Двойное иммуномечение, флуоресцентная и конфокальная микроскопия 46
2.3. 3. Вестерн-блоттинг 47
2.4. Определение уровня мРНК 48
2.4.1.Метод гибридизации in situ 48
2.4.2. Метод обратной транскрипции и ПЦР в реальном времени 50
2.5. Морфофункциональный анализ материала 53
2.6. Определение содержания катехоламинов и их метаболитов в ткани 53
2.7. Статистический анализ результатов 54
Глава 3. Результаты и их обсуждение 55
3.1. Исследование морфофункциональных взаимосвязей AGRP- и
дофаминергических нейронов мозга млекопитающих 55
3.1.1. Взаимосвязи AGRP- с дофаминергическими нейронами мозга у крыс,
отличающихся двигательной активностью 55 3.1.1.1. В цикле бодрствование-сон .55
3.1.1. 2. В тесте открытое поле .56
3.1.2. Влияние AGRP на биосинтез дофамина в экспериментах in vivo .61
3.1.3. Исследование механизмов функционального взаимодействия AGRP и дофаминергических нейронов мозга .70
3.1.3.1. Локализация MКР3 и MКР4 в дофаминергических структурах мозга 70
3.1.3.2. Влияние фрагмента AGRP 83-132 на дофаминергические нейроны в экспериментах in vitro .73
3.1.3. 3. Влияние фрагмента AGRP 25-51 на дофаминергические нейроны в экспериментах in vitro .75
3.2. Исследование морфофункциональных взаимосвязей AGRP- и норадренергических нейронов мозга млекопитающих 76
3.2.1. Исследование морфологических взаимосвязей AGRP- и норадренергических нейронов 76
3.2.2. Локализация МКР3 и МКР4 в норадренергических структурах
3.2.3. Морфофункциональные взаимосвязи AGRP- с норадренергическими нейронами мозга у крыс, отличающихся двигательной активностью (тест открытое поле ) .79
3.2.4. Прямое влияние AGRP на функциональное состояние норадренергических нейронов locus coeruleus в экспериментах in vitro .81
3.3. Морфофункциональная характеристика дофамин- и норадренергических структур мозга при дисфункции AGRPергической системы .82
3.3.1. Морфофункциональная характеристика дофамин- и норадренергических структур мозга у мышей Agouti yellow при ожирении .82
3.3.2. Морфофункциональное состояние вазопрессинергической системы гипоталамуса у мышей Agouti yellow при ожирении 86
3.3.3. Влияние различных фрагментов AGRP на морфофункциональное состояние вазопрессинергических нейронов гипоталамуса в экспериментах in vitro 97
3.4. Исследование влияния катехоламинов на экспрессию AGRP в гипоталамусе млекопитающих .100
3.4. 1. Исследование локализации рецепторов дофамина на AGRPергических нейронах .100
3.4.2. Влияние блокатора Д1 рецепторов дофамина и -метил-паратирозина на экспрессию AGRP в гипоталамусе мышей C57Bl/6J 101
3.4.3. Функциональное состояние AGRPергической системы гипоталамуса на фоне
увеличения уровня дофамина .104
Заключение 106
Выводы 108
Список использованной литературы... 109
