Введение
1 Обзор литературы 13
1.1 Гравитационная разгрузка скелетных мышц 13
1.2 Поиск триггерных механизмов развития гравитационно-зависимой перестройки скелетных мышц 19
1.2.1 Кальций-зависимые механизмы 19
1.2.2 NO-зависимые механизмы 24
1.2.3 АМРК - зависимые механизмы 27
2 Организация и методы исследований 35
2.1 Экспериментальные методы и подходы 35
2.1.1 Объект исследований 35
2.1.2 Изучение эффектов 30-суточного космического полета на спутнике БИОН-М1 на m. longissimus dorsi мышей 36
2.1.3 Антиортостатическое вывешивание крыс различной продолжительности с последующим 7 суточным восстановлением 36
2.1.4 Определение относительного содержания NO в m. soleus крыс на ранних этапах гравитационной разгрузки 37
2.1.5 Изучение воздействия безопорности на m. soleus человека с использованием модели «сухой» иммерсии 38
2.1.6 Введение ингибитора АМРК - Compound C на фоне 7-суточного восстановления 39
2.1.7 1-суточное антиортостатическое вывешивание задних конечностей крыс на фоне предварительного введения AICAR 40
2.2 Методики обработки биоматериала и анализа данных 40
2.2.1 ДДС-электрофорез с последующим вестерн-блоттингом 40
2.2.2 Исследование экспрессии генов 44
2.2.3 Определение относительного содержания NO в мышце 48
2.2.4 Иммуногистохимическое выявление гистондеацетилазы 4 50
2.3 Анализ полученных данных 50
2.3.1 Анализ блотов 50
2.3.2 Анализ данных ПЦР-РВ 51
2.4 Статистическая обработка данных 51
3. Результаты исследования 52
3.1 Исследование влияния реальной и моделируемой микрогравитации на активность АМРК в постуральной мышце животных и человека 52
3.1.1 Изучение действия 30-суточного космического полета на активность АМРК в m. longissimus dorsi мышей 52
3.1.2 Оценка активности АМРК и протеолитических сигнальных путей в камбаловидной мышце человека после 3-суточной «сухой» иммерсии 53
3.1.3 Исследование динамики фосфорилирования АМРК и АСС в камбаловидной мышце крыс на 1, 3, 7 и 14-е сутки моделируемой гравитационной разгрузки 57
3.2 Исследование влияния АМРК на активность p70S6K, ключевого анаболического маркера, в камбаловидной мышце при разгрузке 59
3.2.1 Изучение динамики фосфорилирования p70S6K в камбаловидной мышце крыс на 1, 3, 7 и 14-е сутки моделируемой гравитационной разгрузки 59
3.2.2 Исследование действия активатора АМРК - AICAR на активность p70S6K в m. soleus крыс на начальном этапе гравитационной разгрузки 60
3.2.3 Исследование действия ингибитора АМРК Compound C на активность p70S6K в m. soleus крыс при восстановлении 61
3.3 Изучение эффектов применения активатора АМРК - AICAR в m. soleus крыс при кратковременной функциональной разгрузке 63
4 Обсуждение результатов 73
4.1 Влияние реальной и моделируемой микрогравитации на активность АМРК в постуральной мышце животных и человека 73
4.1.1 Воздействие 30-суточного космического полета на активность АМРК в m. longissimus dorsi мышей 73
4.1.2 Влияние 3-суточной «сухой» иммерсии на активность АМРК в камбаловидной мышце человека 74
4.1.3 Исследование динамики фосфорилирования АМРК в камбаловидной мышце крыс на 1, 3, 7 и 14-е сутки моделируемой гравитационной разгрузки 77
4.2 АМРК регулирует активность сигнального пути mTOR/p70S6K 79
4.2.1 Сравнительный анализ динамики активности АМРК и киназы p70S6K, ключевого регулятора синтеза белка в мышечном волокне 79
4.2.2 Роль АМРК в регуляции активности сигнального пути mTOR/p70S6K 81
4.2.3 Действие Compound C, ингибитора АМРК, на процессы восстановления в m. soleus крыс 82
4.3 Роль АМРК в процессах изменения экспрессии генов и ядерно-цитоплазматического трафика гистондеацетиллаз класса IIA в камбаловидной мышце крыс на начальном этапе гравитационной разгрузки 85
Заключение 90
Выводы 92
Список литературы 93
