Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 13
1.1. Механизмы формирования и поддержания иммунной памяти 13
1.2. Семейство цитокинов с общей гамма () цепью 15 1.2.1. IL-2 и его рецептор: строение, функции, влияние на гомеостаз Т-клеток 16
1.2.2. IL-7 и его рецептор: строение, функции, влияние на гомеостаз Т-клеток 19
1.2.3. IL-15 и его рецептор: строение, функции, влияние на гомеостаз Т-клеток 20
1.3. Роль CD4+ и CD8+ лимфоцитов в генерации иммунной памяти 22
1.4. Общий лейкоцитарный рецептор - молекула CD45: строение и функциональные 95 особенности
1.5. Альтернативный сплайсинг молекулы CD45 28
ГЛАВА 2. Материал и методы исследований 38
2.1. Объект и материал исследования 38
2.2. Методы исследования 38
2.2.1. Выделение мононуклеарных лейкоцитов из периферической крови 40
2.2.2. Выделение «наивных» (CD45RACD62L) и «примированных (CD45RO ) Т-лимфоцитов из фракции мононуклеарных лейкоцитов методом иммуномагнитной сепарации
2.2.3. Культивирование Т-клеток разной степени дифференцировки (CD45RO+ и CD45RA+)
2.2.4. Определение общего числа клеток (в мл) и количества жизнеспособных лимфоцитах в культурах CD45RA и CD45RO+ Т-клеток методом проточной 45 цитометрии
2.2.5. Определение поверхностных молекул - CD4, CD8 и CD28 на Т-клетках разной степени дифференцировки методом проточной цитометрии
2.2.6. Определение поверхностных маркеров конверсии наивных Т-клеток в Т- клетки иммунной памяти (CD45RA/CD45RO) методом проточной цитометрии
2.2.7. Выделение тотальной РНК 47
2.2.8. Обратная транскрипция образцов тотальной РНК 49
2.2.9. Определение уровня относительной экспрессии генов методом мультиплексной ПЦР в режиме реального времени
2.2.10. Методы статистического анализа данных 53
ГЛАВА 3. Результаты собственных исследовании 55
3.1. Оценка эффектов иммунорегуляторных цитокинов, имеющих общую цепь « (IL-2, IL-7, IL-15) на жизнеспособность и общее количество клеток (10 /мл) в
культурах Т-лимфоцитов, имеющих разную степень дифференцировки и разный активационный статус
3.2. Оценка эффектов иммунорегуляторных цитокинов, имеющих общую П-цепь (IL-2, IL-7, IL-15) на мембранную экспрессию молекулы позитивной костимуляции (CD28) в CD4+ и CD8+ субпопуляциях культур Т-лимфоцитов (CD4; CD8), имеющих разную степень дифференцировки и разный активационный статус
3.3. Оценка влияния иммунорегуляторных цитокинов, имеющих общую П-цепь (IL-2, IL-7, IL-15) на экспрессию генов Gfil и U2afll4 в культурах Т-лимфоцитов, имеющих разную степень дифференцировки и разный активационный статус "2
3.4. Оценка влияния иммунорегуляторных цитокинов, имеющих общую П-цепь (IL-2, IL-7, IL-15) на экспрессию гена hnRNPLL в культурах активированных и неактивированных Т-лимфоцитов, имеющих разную степень дифференцировки и разный активационный статус
3.5. Оценка влияния иммунорегуляторных цитокинов, имеющих общую П-цепь (IL-2, IL-7, IL-15) на конверсию фенотипа наивных Т-клеток в Т-клетки памяти.
ГЛАВА 4. Обсуждение полученных результатов 75
Выводы 109
Список литературы
