Введение
Глава 1.Обзор литературы .12
1.1 Метаболизм холестерина в процессе злокачественной трансформации клетки...12
1.2 Биосинтез холестерина и роль его промежуточных метаболитов. Оксистеролы...14
1.3 Регуляция гомеостаза холестерина в клетке...17
1.3.1 Печеночный Х рецептор. Общее представление о работе рецептора и его лигандах ...18
1.3.2 Роль печёночного X рецептора в регуляции гомеостаза холестерина...21
1.3.3 Печеночный Х рецептор как мишень для воздействия на опухолевую клетку...23
1.4 KRas онкогенный белок...24
1.4.1 Структура KRas и его посттрансляционная липидная модификация как необходимый этап «созревания» белка...25
1.4.2 Место и роль KRas белка в системе внутриклеточных сигнальных путей. Последствия мутаций K-ras гена ...28
1.5 Современные методы лечения злокачественных опухолей, вызванных нарушениями работы KRas и EGFR. Перспективы воздействия на метаболизм холестерина в таких типах раковых заболеваний...30
1.6 Заключение .32
Экспериментальная часть .34
Глава 2. Материалы и методы исследования .34
2.1 Реактивы и оборудование 34
2.2 Объекты исследования .38
2.2.1 Объекты исследования in vitro .38
2.2.2 Объекты исследования in vivo 40
2.3 Исследование кожных папиллом in vivo .41
2.4 Анализ уровня экспрессии генов методом количественной ПЦРс обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР)...43
2.5 Препарация и анализ образцов кожи мышей...43
2.6 Трансфекция клеток малой интерферирующей РНК...44
2.7 Анализ жизнеспособности клеток in vitro .45
2.8 Анализ уровня экспрессии белков методом Вестерн Блот...46
2.9 Анализ активации LXR с использованием люциферазного репортёра...47
2.10 Получение стабильных клонов SCC61 с повышенной экспрессией белка LXR...48
2.11 Окрашивание клеток на -галактозидазу, связанную со старением...49
2.12 Статистическая обработка данных...50
ГЛАВА 3. Результаты исследования 50
3.1 Влияние конститутивного и тамоксифен-обусловленного удаления NSDHL на пролиферацию кератиноцитов мышей in vivo .50
3.2 Влияние удаление NSDHL на появление и развитие KRasG12D-опосредованных кожных папиллом in vivo...56
3.3 Влияние удаления NSDHL на скорость роста и процесс иммортализации KRasG12D -мутантных первичных мышиных эмбриональных фибробластов...61
3.4 Активация экспрессии мишеней LXR в кератиноцитах мышей при удалении NSDHL в экспериментах in vivo .63
3.5 Активация экспрессии мишеней LXR в NSDHL-дефицитных мышиных эмбриональных фибробластах in vitro .67
3.6 Активация LXR при удалении NSDHL в экспериментах с люциферазным репортёром in vitro...69
3.7 Влияние удаления NSDHL и SC4MOL на активацию мишеней LXR в опухолевых клетках SCC61 и A431...70
3.8 Обратимость эффекта активации экспрессии мишеней LXR в результате выключения вышележащего по пути биосинтеза холестерина фермента СYP51A1 .72
3.9 Влияние LXR и LXR на возникновение эффектов, обусловленных удалением NSDHL в опухолевых клетках...73
3.10 Повышение чувствительности опухолевых клеток SCC61 к агонистам LXR при повышении экспресии LXR в этих клетках...74
3.11 Влияние нарушения гомеостаза холестерина на чувствительность опухолевых клеток к ингибиторам рецептора EGFR...76
Глава 4. Обсуждение результатов 82
Выводы 88
Список литературы .
