Введение
Глава 1. Обзор литературы 13
1.1 Современные представления о функциях CD4+-лимфоцитов 13
1.1.1 Функциональная активность С04+-лимфоцитов 14
1.1.2 Роль CD4+-лимфоцитов в патогенезе аутоиммунных заболеваний 20
1.2 Молекулярные механизмы активации и дифференцировки CD4+ лимфоцитов 23
1.2.1 Молекулярные механизмы регуляции апоптотической гибели лимфоцитов 28
1.3 Галектин-1: структура, функции, механизмы влияния на клетки мишени 33
1.3.1 Структура и функции галектина-1 33
1.3.2 Роль галектина-1 в регуляции иммунного ответа 36
1.3.3 Роль галектина-1 в патогенезе и терапии иммуноопосредованных заболеваний 41
Глава 2. Материал и методы исследования 49
2.1 Материал исследования 49
2.1.1 Характеристика экспериментального блока исследования 50
2.1.2 Характеристика клинического материала 51
2.2 Методы исследования 52
2.2.1 Выделение мононуклеарных лейкоцитов крови 52
2.2.2 Культивирование мононуклеарных клеток 53
2.2.3 Оценка количества апоптотически измененных CD4+-лимфоцитов 56
2.2.4 Исследование деполяризации митохондриальной мембраны
в лимфоцитах крови з
2.2.5 Определение содержания белков Bcl-2, Вах, FoxP3, перфорина в мононуклеарных лейкоцитах 59
2.2.6 Оценка уровня экспрессии транскрипционных факторов дифференцировки С04+-лимфоцитов 61
2.2.7 Оценка содержания цитокинов в культуральных средах мононуклеарных лейкоцитов 64
2.2.8 Оценка содержания лимфоцитов с фенотипом Т-регуляторных клеток 65
2.2.9 Оценка уровня экспрессии мРНК галектина-1 в мононуклеарных лейкоцитах 67
2.2.10 Статистический анализ результатов исследования 69
Глава 3. Результаты собственных исследований 70
3.1 Результаты исследования влияния галектина-1 на апоптоз С04+-лимфоцитов 71
3.1.1 Содержание апоптотически измененных С04+-лимфоцитов при действии рекомбинантного галектина-1 in vitro 71
3.1.2 Изменение трансмембранного потенциала митохондрий лимфоцитов при действии рекомбинантного галектина -1 74
3.1.3 Содержание белков семейства Вс1-2 в мононуклеарных клетках при действии рекомбинантного галектина-1 76
3.2 Результаты исследования влияния галектина-1 на
дифференцировку С04+-лимфоцитов 77
3.2.1 Экспрессия мРНК транскрипционных факторов С04+-лимфоцитов при действии рекомбинантного галектина-1 78
3.2.2 Продукция цитокинов С04+-лимфоцитов при действии рекомбинантного галектина-1 80
3.3 Результаты исследования влияния галектина-1 на
дифференцированные регуляторные Т-лимфоциты 83
3.3.1 Результаты экспериментального подбора доз рекомбинантных цитокинов для осуществления дифференцировки
С04+-лимфоцитов в Т-регуляторные клетки 83
3.3.2. Содержание клеток с фенотипом регуляторных Т лимфоцитов при действии рекомбинантного галектина-1 86
3.3.3 Содержание транскрипционного фактора FoxP3 в лизатах мононуклеарных лейкоцитов при действии рекомбинантного галектина-1 91
3.3.4 Содержание цитолитического белка перфорина в лизатах мононуклеарных лейкоцитов при действии рекомбинантного галектина-1 92
3.4 Экспрессия мРНК галектина-1 в мононуклеарных клетках
здоровых доноров и пациентов с ревматоидным артритом 93
Глава 4. Обсуждение результатов 97
4.1 Влияние галектина-1 на апоптоз С04+-лимфоцитов 99
4.2 Влияние галектина-1 на дифференцировку CD4+-лимфоцитов 105
4.3 Влияние галектина-1 на дифференцированные in vitro регуляторные С04+-лимфоциты 115
Выводы 123
Список использованных сокращений 124
Список литературы
