ВВЕДЕНИЕ .................................................................................................................. 6
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ ............................................................................ 15
1.1 Герпесвирусы человека .................................................................................... 15
1.1.1 Общие сведения о герпесвирусах человека ................................................. 15
1.1.2 Структура и репликация герпесвирусов ...................................................... 18
1.1.3 Латентная герпесвирусная инфекция ........................................................... 21
1.1.4 Реактивация герпесвирусов .......................................................................... 24
1.2 Заболевания, вызываемые герпесвирусами человека ........................................ 26
1.3 Хронические и острые воспалительные заболевания человека ........................ 29
1.3.1 Хронические воспалительные инфекционные заболевания. Хронические
гепатиты .................................................................................................................. 30
1.3.2 Хронический простатит/синдром хронической тазовой боли .................... 32
1.3.3 Мужское бесплодие ....................................................................................... 33
1.3.4 Коронавирус SARS-CoV-2 и COVID-19 ...................................................... 35
1.4 Противовирусные соединения в отношении герпесвирусов человека ............. 37
1.4.1 Зарегистрированные соединения, обладающие противовирусной
активностью в отношении цитомегаловирусной инфекции ................................ 37
1.4.2 Кандидатные соединения для борьбы с герпесвирусными инфекциями ... 39
1.4.2.1 Фуллерены. Характеристика и противовирусные свойства ..................... 39
1.4.2.2 Дисперсный фуллерен С60 .......................................................................... 41
1.4.2.3 Гетеродимеры против ЦМВИ .................................................................... 42
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ................................... 45
2.1 Дизайн исследования ........................................................................................... 45
2.2 Основные реактивы .............................................................................................. 46
2.3 Пациенты .............................................................................................................. 47
2.3.1 Клинические материалы ............................................................................... 49
2.3.2 Дифференциальная диагностика вирусного гепатита ................................. 50
2.3.3 Обследование пациентов с хроническим гепатитом С ............................... 50
2.3.4 Анализ уровня цитокинов в образцах эякулята ........................................... 51
2.4 Анализ ДНК герпесвирусов человека методом ПЦР в реальном времени в
клинических образцах от пациентов и в клеточной культуре ................................. 51
2.5 Анализ противовирусной активности изученных соединений .......................... 53
2.5.1 Клеточная культура ....................................................................................... 53
2.5.2 Вирус .............................................................................................................. 53
2.5.3 Определение инфекционной активности вируса ......................................... 54
2.5.4 Производные фуллерена С60 ......................................................................... 54
2.5.5 Дисперсный фуллерен dС60 ........................................................................... 55
2.5.6 Гетеродимеры ................................................................................................ 56
2.5.7 Определение цитотоксических свойств соединений ................................... 58
2.5.8 Определение противовирусной активности соединений ............................ 58
2.5.9 Иммуноцитохимическое окрашивание клеток культуры ........................... 60
2.5.10 Изучение влияния dС60 на адсорбцию ЦМВ на клеточной мембране ...... 61
2.5.11 Изучение влияния фуллерена dС60 на экспрессию вирусных белков в
лечебной схеме воздействия .................................................................................. 63
2.5.12 Выявление белков методом иммуноблоттинга в клеточной культуре ..... 63
2.5.13 Измерение концентрации белков в пробах для электрофореза по методу
Брэдфорда ............................................................................................................... 64
4
2.5.14 Анализ мРНК вирусных и клеточных генов методом ПЦР с обратной
транскрипцией (ОТ-ПЦР) в культуре клеток ....................................................... 65
2.6 Статистическая обработка результатов .............................................................. 66
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ .......................... 67
3.1 Влияние ГВЧ на течение и прогноз гепатитов разной этиологии ..................... 67
3.1.1 Распространённость герпесвирусов человека среди больных с гепатитами
................................................................................................................................. 67
3.1.2 Анализ клинико-лабораторных данных ....................................................... 69
3.1.3 Сравнительный анализ частоты выявления герпесвирусов в различных
биологических материалах от больных гепатитом С ........................................... 72
3.2 Герпесвирусы в хронических воспалительных заболеваниях урогенитального
тракта мужчин ............................................................................................................ 80
3.2.1 Обнаружение герпесвирусов при ХП/СХТБ и действие противовирусной
терапии .................................................................................................................... 80
3.2.2 Влияние ГВЧ-инфекций на цитокиновый профиль спермоплазмы мужчин с
ХП/СХТБ ................................................................................................................ 87
3.2.3 Ассоциация герпесвирусов с мужским бесплодием .................................... 89
3.3 Cравнительный анализ ДНК герпесвирусов человека в аутопсийных образцах
от умерших пациентов с подтверждённым диагнозом COVID-19, с разной степенью
повреждения органов ................................................................................................. 94
3.4 Цитотоксические и противовирусные свойства соединений........................... 100
3.4.1 Цитотоксические свойства производных фуллерена С60 и дисперсного
фуллерена dС60 ..................................................................................................... 100
3.4.2 Противовирусные свойства производных фуллерена С60 и дисперсного
фуллерена dС60 ..................................................................................................... 101
3.4.3 Механизм действия дисперсного фуллерена dС60 против
цитомегаловирусной инфекции in vitro .............................................................. 105
5
3.4.3.1 Влияние дисперсного фуллерена dС60 на адсорбцию ЦМВ на клеточной
мембране ............................................................................................................... 105
3.4.3.2 Влияние дисперсного фуллерена dС60 на экспрессию генов ЦМВ UL122 и
UL54 ...................................................................................................................... 106
3.4.3.3 Влияние фуллерена dС60 на содержание вирусных белков в клетках,
зараженных ЦМВ ................................................................................................. 107
3.4.3.3.1 Иммуноцитохимический анализ влияния dС60 на содержание вирусных
белков .................................................................................................................... 107
3.4.3.3.2 Анализ влияния dС60 на содержание вирусных белков методом
иммуноблотинга ................................................................................................... 109
3.4.4 Противовирусные свойства гетеродимеров в отношении
цитомегаловирусной инфекции ........................................................................... 110
ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ ......................... 112
ВЫВОДЫ ................................................................................................................. 126
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ ............................. 128
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ ........................................................................................ 131
Приложение А Названия, формулы и молекулярная масса производных фуллерена
С60 ..............................................................................................................................151
