Введение
Глава 1. Кальпаиновая система 12
1.1. История открытия кальпаинов 12
1.2. Доменная структура - и m-кальпаинов 13
1.3. Cа2+-индуцированный механизм активации кальпаинов 14
1.4. Субстраты кальпаинов 15
1.5. Регуляция активности кальпаинов 16
Глава 2. Структура и функциональные свойства гигантских мышечных белков тайтина/титина и небулина – субстратов кальпаиновых протеаз 18
2.1. Современные представления о структурно-функциональных свойствах тайтина/титина 18
2.2. Структура и функциональные свойства тайтина в разных зонах саркомера 21
2.3. Структурно-функциональные свойства небулина и его расположение в саркомере 25
Глава 3. Изменения в мышцах при развитии алкогольной миопатии 28
3.1. Острая и хроническая формы алкогольной миопатии 28
3.2. Влияние хронической алкогольной интоксикации на транскрипцию и трансляцию 30
3.3. Влияние хронической алкогольной интоксикации на активность mTOR сигнального пути синтеза белка 31
Резюме 33
Глава 4. Материалы и методы 34
4.1. Хроническая алкоголизация крыс 34
4.2. ДСН-гель-электрофорез и Вестерн-блот анализ кальпаина и кальпастатина 35
4.3. ДСН-гель-электрофорез тайтина и небулина и денситометрия 36
4.4. Определение уровня фосфорилирования тайтина 38
4.5. Подбор праймеров с использованием программы Vector NTI Advance 11 38
4.6. Выделение тотальной РНК 40
4.7. Обратная транскрипция и ПЦР в реальном времени 40
4.8. Фракционирование ДНК методом электрофореза в 2% агарозном геле 41
4.9. Измерение активности кальпаинов набором
Calpain Activity Assay Kit (Abcam) 41
4.10. Статистическая обработка данных 41
Глава 5. Результаты и обсуждение 43
5.1. Изменения веса тела и веса поперечно-полосатых мышц хронически алкоголизированных крыс 43
5.2. Исследование содержания -кальпаина и его аутолизированных изоформ в поперечно-полосатых мышцах хронически алкоголизированных крыс 46
5.3. Изменения содержания тайтина и небулина, а также экспрессии генов этих белков в поперечно-полосатых мышцах хронически алкоголизированных крыс 50
5.4. Исследование содержания кальпастатина (ингибитора кальпаинов) в поперечно-полосатых мышцах хронически алкоголизированных крыс 60
5.5. Исследование общего уровня фосфорилирования тайтина и небулина в поперечно-полосатых мышцах хронически алкоголизированных крыс 63
5.6. Влияние хронической алкогольной интоксикации на экспрессию генов исследованных белков 66
Заключение 68
Выводы 70
Cписок литературы
