Введение
1. Воспаление и эндотелиальные дисфункции 12
1.1. Синдром системного воспалительного ответа 12
1.2. Фактор некроза опухоли (ФНО) 15
1.2.1 Сигнальный комплекс I – TRADD-RIP1RAF2 17
1.2.1.1. Активация NFB-зависимого каскада 18
1.2.1.2. Активация МАР-киназного каскада 19
1.2.2 Сигнальный комплекс II—TRADD-RIP-1RAF-2-FADD- прокаспаза 8/10 19
1.2.2.1. Внешний путь индукции апоптоза 21
1.2.2.2. Внутренний путь индукции апоптоза 22
1.2.2.3. Семейство белков Bcl-2 и регуляция апоптоза 23
1.2.2.4. Регуляция белка Bcl-2 в клетке 24
1.3. Эндотелиальные дисфункции и механизмы их возникновения 26
1.3.1. Организация межклеточных контактов эндотелия 28
1.3.1.1 Плотные межклеточные контакты 29
1.3.1.1.1. Трансмембранные белки плотных контактов 30
1.3.1.1.2. Внутриклеточные белки плотных контактов 31
1.3.1.2 Адгезионные межклеточные контакты 32
1.3.1.2.1. Регуляция проницаемости за счет изменения уровней
экспрессии белков адгезионных контактов 35
1.3.1.2.2. Регуляция проницаемости за счет фосфорилирования белков адгезионных контактов 36
1.3.1.2.3. Регуляция проницаемости за счет ферментативного расщепления белков адгезионных контактов 39
2. Активные формы кислорода и их функции 44
2.1. Окислительный стресс и дисфункции митохондрий 47
2.1.1. Митохондриально-направленные антиоксиданты 48
2.1.1.1. Семейство MitoQ 48
2.1.1.2. Семейство SkQs 49
2.1.1.3. Соединения семейства TEMPO 50
2.1.2. Разобщители окислительного фосфорилирования 50
2.1.2.1. 2,4-Динитрофенол 50
2.1.2.2. Липофильные катионы семейства SkQs 52
3. Материалы и методы исследования 56
3.1. Клеточные культуры 56
3.1.1. Иммунофлуоресцентная микроскопия 57
3.1.2. Иммуноблотинг 58
3.1.3. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) в реальном времени 58
3.1.4. Проницаемость эндотелия in vitro 59
3.1.5. Зимография 59
3.2. Животные 59
3.2.1. Инъекции, мониторинг 60
3.2.2. Полимеразная цепная реакция в реальном времени
3.2.2.1. Выделение РНК из аорт мышей 60
3.2.2.2. Обратная транскрипция 61
3.2.2.3. Анализ концентрации мРНК методом ПЦР в реальном времени 61
3.3. Статистическая обработка результатов 63
4. Результаты и обсуждение 64
4.1. Низкие дозы разобщителей окислительного фосфорилирования и митохондриально-направленных антиоксидантов подавляют проницаемость эндотелия, вызванную ФНО in vitro 65
4.2. Низкие дозы разобщителей окислительного фосфорилирования и митохондриально-направленных антиоксидантов подавляют вызванное ФНО расщепление VE-кадгерина металлопротеазой внеклеточного матрикса-9 (ММР-9) 75
4.3. Низкие дозы разобщителей окислительного фосфорилирования и митохондриально-направленных антиоксидантов подавляют стимулированную ФНО экспрессию мРНК ММР-9 83
4.4. Подавление стимулированной ФНО экспрессии мРНК ММР-9 под действием разобщителей окислительного фосфорилирования и антиоксидантов происходит за счет ингибирования активации NFB 85
4.5. Низкие дозы разобщителей окислительного фосфорилирования и митохондриально-направленных антиоксидантов предотвращают гибель мышей, вызванную внутривенным введением мФНО 91
4.6. Низкие дозы разобщителей окислительного фосфорилирования и митохондриально-направленных антиоксидантов снижают уровни экспрессии молекул адгезии в аортах мышей после внутривенного введения мФНО 93
Заключение 100
Выводы 103
Благодарности 104
Список литературы
