Введение
Глава 1. Обзор литературы
1.1. Общая характеристика семейства орексинов 12
1.1.1. Строение молекул препро-орексина и орексинов 12
1.1.2. Локализация орексинергических нейронов в мозге и их проекции 14
1.1.3 Рецепторы орексинов 16
1.1.4. Орексинергические нейроны обонятельной выстилки 19
1.1.5. Развитие орексинергической системы в онтогенезе 21
1.1.6. Регуляция экспрессии гена препро-орексина 23
1.1.7. Функции орексинергических нейронов мозга
1.1.7.1. Участие орексинов в регуляции пищевого поведения и энергетического баланса 24
1.1.7.2. Роль орексинов в регуляции цикла бодрствование-сон 26
1.2. Общая характеристика катехоламинергической системы 27
1.2.1. Локализация дофаминергических нейронов в мозге 28
1.2.2. Рецепторы дофамина 29
1.3. Общая характеристика серотонинергической системы 30
1.3.1. Локализация серотонинергических нейронов 31
1.3.2. Рецепторы серотонина 32
1.4. Взаимодействие орексин- и моноаминергической систем мозга 33
1.5 Дисфункции моноаминергических систем. Модельные линии животных . 34
Глава 2 Материалы и методы
2.1 Экспериментальные животные и экспериментальные модели 38
2.1.1. Модели in vivo (постнатальный период)
2.1.1.1. Моделирование дефицита катехоламинов с помощью введения -метил-паратирозина, SCH 39166 и L-741,626 38
2.1.1.2. Модель дисбаланса моноаминов (крысы линий Крушинского-Молодкиной, WAG/Rij и DAT-KO) 39
2.1.1.3. Депривация сна 40
2.1.1.4. Иммобилизационный стресс 41
2.1.1.5. Тест «открытое поле» 41
2.1.1.6. Меланокортиновое ожирение (мыши Agouti yellow (Ay/a) 42
2.1.1.7. Диета-индуцированное ожирение у крысы и мыши 42
2.1.2. Модели in vivo (пренатальный период)
2.1.2.1. Контроль сроков пренатального развития крысы 43
2.1.2.2. Пренатальный стресс с помощью метода «малых площадок» 43
2.2. Обработка материала 44
2.3. Иммуногистохимические методы
2.3.1. Биотин-стрептавидиновый метод 46
2.3.2. Двойное флуоресцентное иммуномечение 48
2.4. Вестерн-блоттинг 48
2.5. Метод обратной транскрипции и ПЦР в реальном времени 50
2.6. Получение изображений и их анализ 53
2.7. Определение уровня моноаминов и их метаболитов в ткани 54
2.8. Статистический анализ результатов 54
Глава 3 Результаты и их обсуждение
3.1. Исследование влияния дофамина на орексинергические нейроны перифорникальной области гипоталамуса
3.1.1. Структурно-функциональные взаимодействия орексинергических и ТГ-иммунопозитивных структур мозга 56
3.1.2. Экспрессия Д1- и Д2 рецепторов дофамина в структурах перифорникальной области 57
3.2. Исследование влияния серотонина на орексинергические нейроны гипоталамуса
3.2.1. Экспрессия рецепторов серотонина орексинергическими нейронами 60
3.3. Морфофункциональное состояние орексинергической системы на фоне дисбаланса моноаминов
3.3.1. Изменение уровня сFos белка в орексинергических нейронах после введения антагониста Д1 рецептора дофамина 62
3.3.2. Влияние селективных антагонистов Д1- и Д2-рецепторов дофамина и МПТ на уровень орексина-А в нейронах гипоталамуса 64
3.3.3. Орексин-иммунопозитивные клетки в ретикулярном ядре таламуса 66
3.3.4. Влияние селективных антагонистов Д1- и Д2-рецепторов дофамина и МПТ на уровень орексина-А в клетках ретикулярного ядра таламуса 67
3.3.5. Функциональное состояние орексинергической системы гипоталамуса на фоне изменения баланса моноаминов в гипоталамусе 68
3.3.6. Функциональное состояние орексинергической системы после стрессорного воздействия в постнатальном периоде 73
3.4. Формирование морфофункциональных взаимосвязей орексин иммунопозитивных нейронов с дофамин- и серотонинергической системами мозга в ходе эмбрионального развития крысы 77
3.5. Формирование ольфакторной орексинергической системы в ходе эмбрионального развития 83
3.6. Анализ формирования орексинергической и моноаминергических систем гипоталамуса в раннем постнатальном периоде онтогенеза
3.6.1. Влияние пренатального стресса на функциональное состояние орексинергической и моноаминергических систем мозга 87
3.6.2. Анализ тирозингидроксилазы и глутаматдекарбоксилазы в стриатуме после пренатального стресса 91
3.7. Морфофункциональное состояние орексинергической системы гипоталамуса при ожирении у грызунов
3.7.1. Морфофункциональное состояние орексинергической системы гипоталамуса крысы при диета-индуцированном ожирении 96
3.7.2. Морфофункциональное состояние орексинергической системы гипоталамуса мышей C57Bl/6J при диета-индуцированном ожирении 99
3.7.3. Морфофункциональное состояние орексинергической системы гипоталамуса мышей Agouti yellow при меланокортиновом типе ожирении 100
3.7.4. Морфофункциональные взаимодействия дофамин– и серотонинергической систем с орексинергическими нейронами гипоталамуса при ожирении 106
Заключение 111
Выводы 112
Список литературы 114
Приложение 141
