Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 13
1.1. Эпителиальный рак яичников: общие сведения 13
1.1.1. Клинические особенности ЭРЯ 13
1.1.2. Классификации злокачественных эпителиальных опухолей яичников: связь с концепциями этиологии и патогенеза ЭРЯ
1.2. Влияние иммунного микроокружения на развитие ЭРЯ 16
1.3. Молекулярные механизмы развития ЭРЯ
1.3.1. Участие белков фокальных контактов в развитии ЭРЯ 17
1.3.2. ЭРЯ и регуляция апоптоза: PI3K/AKT/mTOR каскад 20
1.3.3. ЭРЯ и регуляция клеточного деления: ERBB2-RAS-MAPK сигнальный путь 21
1.3.4. ЭРЯ и регуляция клеточного деления: Aurora-киназы 22
1.3.5. ЭРЯ, межклеточные контакты и эпителиально-мезенхимальный переход 24
1.3.6. STAT3: участие в воспалительных процессах и метастазировании ЭРЯ 26
1.4. NEDD9 как участник молекулярной сигнализации злокачественных
новообразований 27
1.4.1. История открытия и названия NEDD9 28
1.4.2. Строение белка NEDD9 29
1.4.3. Участие NEDD9 в молекулярной сигнализации и развитии злокачественных патологий 1.4.3.1. Регуляция экспрессии NEDD9 30
1.4.3.2. NEDD9 как регулятор работы фокальных контактов и мишеней их сигнализации 32 1.4.3.3. NEDD9 как регулятор Aurora A киназы 34
1.4.3.4. NEDD9 и эпителиально-мезенхимальный переход 35
1.4.3.5. Участие NEDD9 в передвижении и злокачественных патологиях клеток системы иммунитета 36
1.4.3.6. NEDD9 и рак яичников 37
Экспериментальная часть 38
Глава 2. Материалы и методы исследований 38
2.1. Реактивы и оборудование 38
2.1.1. Реактивы 38
2.1.2. Оборудование 41
2.2. Объекты исследований 43
2.2.1. In vivo мышиные модели ЭРЯ 43
2.2.1.1. Мыши, нокаутные по Nedd9 43
2.2.1.2. Мышиная модель спонтанного ЭРЯ 44
2.2.1.3. Сингенетическая мышиная модель ЭРЯ 45
2.2.2. Клеточные линии 45
2.3. Исследование влияния экспрессии NEDD9 на развитие спонтанного ЭРЯ in vivo 47
2.3.1. In vivo магнитно-резонансная томография 47
2.3.2. Исследование инфильтрации иммунныx клеток в мышах при помощи проточной цитометрии 48
2.4. In vitro эксперименты на культурах клеток ЭРЯ человека и мыши 50
2.4.1. Исследование клеточной пролиферации 50
2.4.2. Исследование клеточной адгезии 50
2.4.3. Клеточная миграция и инвазия в градиенте ФБС 51
2.4.4. Исследование клеточной миграции на двумерной поверхности 52
2.4.5. Нокдаун гена NEDD9 в клетках ЭРЯ мыши и человека 52
2.4.6. Нокдаун генов STAT3, Fak и Src в клетках MOVCAR 5009 и
иммунофлюоресцентный анализ 55
2.5. Сравнение влияния внутриопухолевой экспрессии NEDD9 на развитие ЭРЯ в с таковым в микроокружении опухоли 56
2.6. Исследование общей генной экспрессии в спонтанных опухолях мышей MISIIRAg 59
2.7. Иммунологические методы
2.7.1. Вестерн-блоттинг 60
2.7.2. Коиммунопреципитация 61
2.7.3. Иммунофлюоресцентное окрашивание клеток 62
2.8. Статистический анализ 62
ГЛАВА 3. Результаты исследований 63
3.1. Роль NEDD9 в развитии спонтанного ЭРЯ 63
3.1.1. Влияние делеции Nedd9 на развитие спонтанных опухолей яичников 63
3.1.2. Влияние делеции Nedd9 на молекулярную сигнализацию в опухолях MISIIRAg мышей 63
3.2. Влияние NEDD9, экспрессируемого в микроокружении опухоли, на
развитие ЭРЯ 67
3.2.1. Влияние делеции Nedd9 в микроокружении опухоли на развитие опухолей яичников 67
3.2.2. Влияние делеции Nedd9 в микроокружении опухоли на молекулярную сигнализацию в опухолях яичников 69
3.2.3. Влияние делеции Nedd9 на инфильтративность клеток системы иммунитета 70
3.3. Влияние экспрессии NEDD9 в клетках первычных опухолей на развитие эпителиального рака яичников 72
3.3.1. Влияние делеции Nedd9 на агрессивность клеток ЭРЯ in vitro 72
3.3.2. Подтверждение in vitro наблюдений при помощи нокдауна Nedd9 в Nedd9+/+ клетках ЭРЯ 75
3.3.3. Влияние внутриклеточной делеции Nedd9 на агрессивность ЭРЯ in vivo 77
3.3.4. Влияние делеции Nedd9 в первичных опухолях на молекулярную сигнализацию 78
3.4. Роль NEDD9 в регуляции активации и локализации STAT3 в клетках ЭРЯ 82
3.4.1. Регуляция активации и локализации STAT3 в фокальных контактах клеток ЭРЯ 82
3.4.2. Исследование образования комплекса между pSTAT3Y705, NEDD9 и pFAKY397.. 83
3.5. NEDD9 как регулятор генной экспрессии в контексте ЭРЯ 84
3.5.1. Влияние делеции Nedd9 на генную экспрессию в опухолях MISIIRАg мышей. 84
3.5.2. Участие NEDD9 в экспрессии генов, регулируемых FOXJ1 92
ГЛАВА 4. Обсуждение результатов 95
Выводы 103
Список литературы
