Введение
I. Обзор литературы 7
1. Морфология, функции и особенности микроциркуляции тонкого кишечника 7
1.1.Морфология тонкокишечной стенки 7
1.2. Строение ворсинок и крипт 9
1.3. Функции тонкого кишечника 11
1.4. Особенности кровообращения и микроциркуляции тонкого кишечника 12
2. Этиология и патогенез ишемически-реперфузионного (И-Р) поражения тонкого кишечника 14
2.1 Этиология И-Р поражения тонкого кишечника 14
2.2. Патогенез И-Р поражения тонкого кишечника 17
2.2.1 Биохимические основы окислительного стресса 17
2.2.2. Патогенез микроциркуляторной дисфункции 22
2.2.3. Патогенез И-Р поражения тонкого кишечника 25
3. Антиоксидантные системы организма 27
3.1. Ферментативное звено 27
3.2. Семейство пероксиредоксинов (Prxs)
3.2.1. Характеристика семейства Prxs. 30
3.2.2. Роль Prxs в защите клеток млекопитающих от окислительного стресса 33
3.3. Пероксиредоксин 6 и медицинские аспекты его применения 35
II. Материалы и методы 41
1.Материалы 41
2. Методы 42
2.1. Модели И-Р поражения у крысы 42
2.1.1. Модель странгуляционной тонкокишечной непроходимости 43
2.1.2. Модель окклюзии верхней мезентеральной артерии
2.2. Приготовление гистологического препарата 45
2.3. Иммуногистохимический анализ 46
2.4. Иммуноферментный анализ 47
2.5. Флуоресцентная микроскопия сосудов тонкого кишечника 48
2.6. Лазерная допплеровская флоуметрия 48
2.7. Электрофорез и иммуноблотинг 50
2.8. Измерение концентрации оксида азота в сыворотке крови 51
2.9. Биохимический анализ крови
2.10. Анализ уровня экспрессии генов 51
2.11. Статистические методы 52
III Результаты исследований 53
1. Ишемически-реперфузионное поражение тонкого кишечника крысы 53
1.1. Сравнительная характеристика разных моделей И-Р поражения тонкого кишечника крысы 53
1.1.1 Модель странгуляционной тонкокишечной непроходимости 53
1.1.2. Модель окклюзии верхней мезентеральной артерии 55
1.2. Динамика развития И-Р поражения тонкого кишечника и питающих его сосудов 57
1.2.1. Состояние тонкого кишечника при И-Р поражении 58
1.2.2. Развитие поражения кишечной ткани при И-Р 60
1.2.3. Состояние микроциркуляционного русла тонкого кишечника при И-Р поражении 62
1.2.4. Состояние сосудов брыжейки при И-Р поражении 66
1.3. Динамика экспрессии основных маркерных генов при И-Р поражении 70
1.3.1. Динамика экспрессии генов для белков, ответственных за гибель и пролиферацию клеток при И-Р поражении
1.3.2. Динамика экспрессии генов антиоксидантной системы при И-Р поражении 72
2. Эффект экзогенного пероксиредоксина 6 (Prx6) при И-Р поражении тонкого кишечника 75
2.1. Распределение Prx6 в кишечной ткани 75
2.1.1. Распределение эндогенного Prx6 75
2.1.2. Распределение экзогенного Prx6 77
2.2. Влияние экзогенного Prx6 на развитие И-Р поражения тонкого кишечника и питающих его сосудов 79
2.2.1. Протекторный эффект экзогенного Prx6 при И-Р поражении тонкого кишечника обусловлен его пероксидазной активностью 80
2.2.2. Влияние экзогенного Prx6 на морфологию кишечной ткани при И-Р 82
2.2.3. Влияние экзогенного Prx6 на состояния микроциркуляторного русла тонкого кишечника при И-Р поражении 84
2.2.4. Влияние экзогенного Prx6 на состояние сосудов брыжейки при И-Р поражении 87
2.3. Влияние экзогенного Prx6 на уровень экспрессии маркерных генов при И-Р поражении 90
2.3.1. Влияние экзогенного Prx6 на уровень экспрессии генов, ответственных за гибель и пролиферацию клеток при И-Р поражении 90
2.3.2. Влияние экзогенного Prx6 на уровень экспрессии генов антиоксидантной системы при И-Р поражении 92
IV. Обсуждение результатов исследований 96
Заключение 109
Выводы 111
Публикации по теме диссертации 112
Список цитируемой литературы
