Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 11
1.1. Общая характеристика микромицетов рода Rhizoctonia 11
1.1.1. Характеристика Rhizoctonia solani 11
1.1.2. Способность грибов рода Rhizoctonia к синтезу биологически
активных веществ 13
1.2. Лектины микроскопических грибов 15
1.2.1. Структурная характеристика и классификация 17
1.2.2. Физико-химические свойства 22
1.2.3. Биологические функции 27
1.2.4. Биологическая активность 30
1.3. Заключение 34
Экспериментальная часть 36
Глава 2. Материалы и методы 36
2.1. Объекты исследования 36
2.2. Состав сред для культивирования микроорганизмов 36
2.3. Культивирование и идентификация микромицетов 37
2.4. Молекулярно-генетический анализ микромицетов: выделение ДНК,
ПЦР-амплификация 37
2.5. Определение содержания лектинов в микроорганизмах 38
2.6. Определение содержания белка 39
2.7. Определение активности лектинов 39
2.8. Получение нативных и модифицированных эритроцитов 40
2.9. Хроматографическая очистка лектина 40
2.10. Определение молекулярной массы лектина 41
2.11. Определение первичной структуры лектина 43
2.12. Определение значений рН и температуры (активность и стабильность) лектина 43
2.13. Определение влияния ионов металлов и ЭДТА на активность лектина 44
2.14. Определение углеводной специфичности лектинов 45
2.15. Определение мутагенной активности лектинов (тест Эймса) 45
2.16. Влияние лектина на рост и развитие различных микроорганизмов 46
2.17. Влияние лектина на рост и развитие культур клеток в условиях in vitro 47
2.18. Определение трансмембранного потенциала митохондрий культур клеток в условиях in vitro 48
2.19. Статистическая обработка данных 49
ГЛАВА 3. Результаты исследований 50
3.1. Скрининг микромицетов по способности к синтезу лектинов 50
3.2. Молекулярно-генетическая характеристика изолята микромицета,
синтезирующего наиболее активные лектины. ПЦР-амплификация и секвенирование области ITS1-5.8SrDNA-ITS2 52
3.3. Динамика образования лектинов в зависимости от роста микромицета Rhizoctonia solani 53
3.4. Подбор оптимальной среды культивирования микромицета для повышения процесса образования лектинов 55
3.5. Выделение и очистка лектина микромицета Rhizoctonia solani 60
3.6. Определение степени чистоты и структуры лектина 65
3.7. Исследование некоторых физико-химических и мутагенных свойств лектина Rhizoctonia solani
3.7.1. Специфичность лектина относительно взаимодействия с различными сахарами 71
3.7.2. Температурный оптимум и диапазон стабильности лектина 73
3.7.3. рН-оптимум и диапазон стабильности лектина 74
3.7.4. Влияние ионов металлов на активность лектина 76
3.7.5. Мутагенная активность лектина 78
3.8. Влияние лектина R. solani на рост и развитие условно-патогенных и патогенных бактерий 81
3.9. Влияние лектина R. solani на различные линии опухолевых и нормальных клеток в условиях in vitro 90
3.9.1. Влияние лектина R. solani на индукцию апоптоза в клеточных линиях рака человека 95
Обсуждение результатов 99
Выводы 110
Список литературы 1
