Введение
1. Оксид азота и убиквитин-зависимая деградация белков в нервной системе . 9
1.1. Оксид азота 9
1.1.1. Общие данные о синтезе оксида азота с помощью фермента NO-синтазы 9
1.1.2. Локализация нейрональной NO-синтазы в центральной нервной системе 12
1.2. Убиквитин-зависимая деградация белков 12
1.2.1. Общие данные о строении системы убиквитин-зависимой деградации белков 13
1.2.2. Механизмы регуляции убиквитин-зависимой деградации белков. 15
1.2.3. Участие оксида азота в регуляции убиквитин-зависимой деградации белков 21
2. Участие оксида азота и убиквитин-зависимой деградации белков в синаптической пластичности 22
2.1. Роль оксида азота в синаптической пластичности 22
2.2. Роль убиквитин-зависимой деградации белков в синаптической пластичности 29
3. Роль оксида азота и убиквитин-зависимой деградации белков в обучении и памяти 34
3.1. Роль оксида азота в обучении и памяти. 34
3.2. Роль убиквитин-зависимого распада белков в обучении и памяти 40
3.3. Сравнение данных о роли оксида азота и распада белков в протеасомах в дестабилизации памяти во время напоминания. 42
4. Методы исследования
4.1. Эксперименты с культурой нейронов 44
4.1.1. Протокол получения культуры нейронов и трансдукция вирусом. 44
4.1.2. Продукция вирусов 45
4.1.3. Проведение экспериментов с конфокальным микроскопом 46
4.1.4. Иммуноцитохимия 47
4.1.5. Полупроводниковое секвенирование и биоинформатический анализ данных
4.2. Электрофизиологические эксперименты 50
4.3. Поведенческие эксперименты 52
5. Результаты исследования 56
5.1. Экспрессии нейрональной NO-синтазы и других белков в культуре нейронов 56
5.2. Ингибирование NO-синтазы замедляет падение флуоресценции генетически-кодируемого сенсора убиквитин-зависимой деградации белков 63
5.3. Блокада синтеза оксида азота нарушает долговременную потенциацию, в то время как одновременная блокада оксида азота и синтеза белка предотвращает это нарушение 67
5.4. Ингибирование синтеза NO предотвращает нарушение памяти, вызванное блокадой синтеза белка во время реактивации условно-рефлекторного страха
6. Обсуждение 82
7. Заключение 90
Выводы 91
Благодарности 92
Список литературы 93
