Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 12
1.1. Методы, используемые для оценки силовых взаимодействий в биологии 12
1.1.1. Атомно-силовая микроскопия 12
1.1.2. Магнитный пинцет 13
1.1.3. Диэлектрофорез 14
1.1.4. Оптический пинцет 18
1.2. Использование оптического пинцета в биологических исследованиях 23
1.2.1. Нуклеиновые кислоты 23
1.2.2. Белки 25
1.2.3. Субклеточные структуры, органоиды 27
1.2.4. Эритроциты 27
1.2.5. Манипуляции в системе «прокариоцит – эукариоцит»
1.2.5.1. Система «прокариоцит – модель эукариоцита» 28
1.2.5.2. Система «модель прокариоцита – модель эукариоцита» 29
1.2.5.3. Система «модель прокариоцита – эукариоцит 29
1.3. Адгезины патогенных иерсиний 30
1.3.1. Установленные факторы адгезии иерсиний 31
1.3.2. Липополисахарид как возможный фактор адгезии иерсиний 33
1.3.3. Порины как возможные факторы адгезии иерсиний 36
Экспериментальные исследования 38
Глава 2. Материалы и методы
2.1. Оборудование 38
2.2. Приготовление растворов 38
2.3. Определение вязкости ФБР 39
2.4. Штаммы и условия культивирования 39
2.5. Выделение ЛПС 39
2.6. Определение сухого веса 40
2.7. Определение содержания белка 40
2.8. Пробоподготовка эукариоцитов 40
2.9. Подсчёт клеток в камере Горяева
2.10. Использованные антителосодержащие препараты 40
2.11. Просвечивающая электронная микроскопия 41
2.12. Лазерный пинцет 41
2.13. Статистическая обработка полученных результатов 42
ГЛАВА 3. Результаты исследований и их обсуждение 43
3.1. Отработка условий определения силы связи в системе «модель прокариоцита–макрофаг» методом оптической ловушки 43
3.1.1. Обоснование выбора клеточной культуры 43
3.1.2. Выбор эукариоцита в условиях эксперимента 47
3.1.3. Выбор частотного диапазона исключения при калибровке 48
3.1.4. Выбор фильтра, регулирующего интенсивность лазерного излучения 51
3.1.5. Построение калибровочных кривых 52
3.1.6. Оценка влияния макрообъекта на калибровочные коэффициенты 54
3.1.7. Калибровка на малом расстоянии от клеток 59
3.1.8. Отработка способа регистрации силы связи между микросферами и поверхностью макрофага 60
3.1.9. Критерии выбраковки первичных данных 62
3.2. Значимость поверхностных антигенов для адгезивности иерсиний, оценённая методом оптической ловушки 65
3.2.1. Оценка роли ЛПС как адгезина иерсиний 65
3.2.1.1. Сенсибилизация микросфер препаратами ЛПС 65
3.2.1.2. Обработка сенсибилизированных микросфер антителосодержащими препаратами 66
3.2.1.3. Верификация факта сенсибилизации микросфер препаратом ЛПС-10 66
3.2.1.4. Количественная оценка значимости ЛПС в адгезии иерсиний 68
3.2.2. Оценка роли порина OmpF как адгезина Y. pseudotuberculosis 78
3.2.2.1. Сенсибилизация микросфер препаратом порина OmpF 78
3.2.2.2. Верификация факта сенсибилизации микросфер препаратом порина OmpF 78
3.2.2.3. Количественная оценка значимости порина OmpF для адгезивности Y. pseudotuberculosis 81
Заключение 85
Cписок сокращений и условных обозначений 88
Список литературы
