Введение
ГЛАВА I. Структура, физико-химические и функциональные свойства гемоглобина 19
1.1. Структура молекулы гемоглобина 19
1.2. Спектральные характеристики гемоглобина 28
1.3. Связыванием перенос л игаидов гемоглобином 33
1.4. Структур но-функциональные особенности некоторых лигандных форм гемоглобина 42
1.4.1. Структурные особенности и некоторые физико-химические свойства метгемоглобина 42
1.4.2. Особенности структуры и физико-химических свойств карбоксигемоглобина 45
1.5. Функциональные свойства молекул гемоглобина с различным субъединичиым составом 47
1.6. Структурная организация эритроцитарной мембраны ..53
1.7. Цнтозольная и мембраносвязанная формы внутриэритроцнтариого гемоглобина 57
ГЛАВА 2. Объекты и методы исследования 61
2.1. Объекты исследования 61
2.2. Получение суспензии отмытых эритроцитов 61
2.3. Получение теней эритроцитов 61
2.4. Получение растворов оксигемоглобииа 62
2.5. Получение растворов метгемоглобина 63
2.6. Получение растворов карбоксигемоглобина 64
2.7. Получение димеров гемоглобина различного состава 64
2.8. Формирование гибридов валентности 64
2.9. Образование молекул полигемоглобина 65
2.10. Образование поперечных сшивок между молекулами полигемоглобина, супероксиддисмутазы и каталазы 65
2.11. Регистрация спектров поглощения в УФ- и видимой областях 65
2.12. Регистрация спектров пропускания в ИК-области 66
2.13. Регистрация кривых диссоциации оксигемоглобина 66
2.14. Определение величины константы Хилла 69
2.15. Определение процентного содержания лигадных форм гемоглобина в растворе 70
2.16. Хроматографическое фракционирование на КМ-целлюлозе 70
2.17. Регистрация спектров фотофлуоресценции 71
2.18. Определение каталазной активности растворов гемоглобина 74
2.19. Определение пероксидазной активности растворов гемоглобина 75
2.20. Определение супероксиддисмутаз но и активности 76
2.21. Неэнзиматическое определение содержания фосфатов 77
2.22. Регистрация кривых термоденатурационного плавления гемоглобина в его растворах 80
2.23. Проведение сеансов АУФОК-терапии 82
2.24. УФ-облучение растворов гемоглобина и суспензии эритроцитов 82
2.25. Определение количества ионогенных групп в белковой макромолекуле методом кислотно-основного титрования 84
2.26. Вычисление спектра буферной емкости белка. 87
2.27. Статистическая обработка результатов экспериментов 88
ГЛАВА 3. Изучение кислородсвязывлющих свойств различных структурных форм гемоглобина 89
3.1. Изучение кислородсвязывагощих свойств растворов гемоглобина человека 89
3.2. Изучение кислородсвязывающих свойств гемоглобина в составе эритроцитарных клеток 89
3.3. Исследование кислородсвязывающих свойств мембраносвязанного гемоглобина 92
3.4. Исследование кислородсвязывающих свойств гибридов валентности гемоглобина 93
3.5. Исследование кислородсвязывающих свойств образцов гемоглобина, содержащих димеры различного состава 101
3.6. Исследование кислородсвязывающих свойств образцов полигемоглобина 104
3.7. Исследование кислородсвязывающей способности молекул полигемоглобина содержащих метгемоглобин 107
3.8. Исследование кислородсвязывающей способности молекул полигемоглобина, содержащих карбокси гемоглобин 109
ГЛАВА 4. Изучение влияния уф-излучения (240—390 нм) на кислородсвязывающие свойства различных структурных форм гемоглобина 111
4.1. Влияние УФ-излучения на кислородсвязывающую способность растворов гемоглобина человека 111
4.2. Влияние УФ-света на кислородсвязывающие свойства внутриэритроцитарного гемоглобина 118
4.3. Изучение функциональных свойств фотомодифицированного мембраносвязанного гемоглобина 125
4.4. Изучение УФ-чувствительности тотальных димеров гемоглобина 127
4.5. Исследование УФ-чувствительности частично диссоциированных образцов гемоглобина 128
4.6. Изучение УФ-чувствительности гибридов валентности гемоглобина 129
4.7. Изучение УФ-чувствительности молекул полигемоглобина 132
ГЛАВА 5. Изучение кислородсвязывающих свойств гемоглобина, модифицированного интегральным уф-излучением и серотонином 135
5.1. Влияние серотонина на кислородтранспортные свойства растворов гемоглобина 135
5.2. Кислородсвязывающие свойства гемоглобина, подвергнутого сочетанному воздействию УФ-излучения и серотонина 143
5.3. Изучение кислородсвязывающих свойств тотальных димеров гемоглобина, УФ-облученных в присутствии серотонина 151
5.4. Изучение кислородсвязывающих свойств частично диссоциированных молекул гемоглобина, УФ-облученных в присутствии серотонина 152
5.5. Исследование УФ-чувствительности модифицированных серотонином гибридных молекул гемоглобина 156
5.6. Исследование кислородсвязывающих свойств полигемоглобина, УФ-облученного в присутствии серотонина 160
ГЛАВА 6. Влияние длинноволнового уф-излучения (300-400 нм) на структурно-функциональные свойства гемоглобина 163
6.1. Влияние ДУФ-света на спектральные свойства гемоглобина 163
6.2. Влияние ДУФ-света на кислородевязывающую функцию тетрамеров гемоглобина 167
6.3. Влияние ДУФ-света на кислородсвязывающие свойства гемоглобина с измененной структурой субъединичных контактов 170
6.4. Влияние ДУФ-света на спектральные свойства гемоглобина человека в присутствии серотонина 174
6.5. Кислородсвязывающие свойства гемоглобина, подвергнутого воздействию ДУФ-света в присутствии серотонина 175
6.6. Исследование термодинамических параметров молекул гемоглобина, ДУФ-облученных в свободном состоянии и в присутствии серотонина 177
ГЛАВА 7. Изучение динамики основных лигандных форм гемоглобина в растворе и в составе эритроцитарной клетки после воздействия уф-излучения 180
7.1. Влияние интегрального потока УФ-света на содержание основных лигандныхформ гемоглобина в растворе 180
7.2. Влияние длинноволнового УФ-света на содержание основных лигандныхформ гемоглобина в растворе 188
7.3. Исследование фоторезистентности эритроцитов , 191
7.4. Исследование процентного содержания лигандных форм гемоглобина, полученных из супернатанта УФ-облученных эритроцитов 193
7.5. Исследование процентного содержания лигандных форм гемоглобина, полученных из гематокрита УФ-облученных эритроцитов .198
ГЛАВА 8. Исследование сочетанного влияния карнозина и уф-излучения на структурно функциональные свойства гемоглобина 204
8.1. Кислород связывающие свойства растворов гемоглобина в присутствии карнозина 204
6.1. Кислородсвязывающие свойства растворов гемоглобина, УФ-облученного в присутствии карнозина 210
8.1. Изучение функциональных свойств внутриэритроцитарного гемоглобина, модифицированного карнозином 213
8.2. Кислородсвязывающие свойства внутриэритроцитарного гемоглобина, подвергнутого воздействию УФ-света в присутствии карнозина 213
8.3. Влияние карнозина на содержание лигандных форм гемоглобина в растворе 218
8.4. Исследование сочетанного влияния интегрального потока УФ-излучения и карнозина на содержание лигандных форм гемоглобина в растворе 220
8.5. Исследование сочетанного влияния ДУФ-излучения и карнозина на содержание лигандных форм гемоглобина в растворе 229
8.6. Исследование физико-химического состояния комплекса гемоглобин-карнозин методом сканирующей микрокалориметрии 234
ГЛАВА 9. Исследование структурных перестроек в молекулах гемоглобина при формировании комплекса с серотонином 237
9.1. Исследование флуоресцентных свойств растворов серотонина 237
9.2. Изучение флуоресцентных свойств комплекса гемоглобин-серотоиин 239
9.3. Исследование ИК-спектров образцов гемоглобин-серотонин 243
9.4. Влияние серотонина на содержание лигандных форм гемоглобина в растворе 246
9.5. Определение типов химических реакций между гемоглобином и серотонином 247
9.6. Зависимость механизма формирования комплекса гемоглобин-серотонин от концентрации и структурного состояния биогенного амина 251
9.7. Изучение сочетанного влияния интегрального потока УФ-излучения (240—400 нм) и серотонина на содержание лигандных форм гемоглобина в растворе 257
9.8. Изучение сочетаніїого влияния ДУФ-излучения (300—400 нм) и серотонина на содержание лигандных форм гемоглобина в растворе 260
ГЛАВА 10. Изучение роли сульфгидрильных групп в фотомодификации функциональных свойств гемоглобина 268
10.1.Влияние иодацетамида на кислородтранспортную функцию гемоглобина 268
10.2.Изучсние фоточувствителыюсти гемоглобина в присутствии иодацетамида , 273
10.3. Кислородтранспортные свойства гемоглобина крови больных бронхиальной астмой до и после применения АУФОК-терапии 278
10.4. Исследование содержания 2,3-ДФГ и АТФ в эритроцитах крови доноров и больных бронхиальной астмой после АУФОК-терапии 283
ГЛАВА 11. Структурно-функциональные свойства уф-облученных полифункциональных ассоциатов гемоглобина 287
11.1. Исследование каталазной активности различных 287
11.2. Изучение псроксидазной активности различных структурных форм гемоглобина 289
11.3. УФ-чувствитсльность молекул полигемоглобина, связанных поперечными сшивками с молекулами супероксиддисмутазы 291
11.4. УФ-чувствителыюсть молекул полигемоглобина, связанных поперечными сшивками с молекулами каталазы 300
Заключение 305
Выводы 318
Список литературы 321
