Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 14
1.1. Повреждения растений при гипотермии 16
1.2. Приспособление растений к понижению температуры окружающей среды
1.3. Функции белков, регулируемых холодом 29
1.4. Восприятие холодового сигнала растительными клетками 52
1.5. Факторы, участвующие в регуляции экспрессии генов при 64 холодовом стрессе
1.6. Гормональная регуляция экспрессии COR-генов растений 72
1.7. Статус метилирования ДНК растений и устойчивость к стрессовым 76 факторам среды
ГЛАВА 2. Материалы и методы 89
2.1. Объекты исследования 89
2.2. Выделение и очистка ДНК растений 90
2.3. Выделение и очистка РНК растений 91
2.4. Аналитический гель-электрофорез ДНК 92
2.5. Расщепление ДНКрестрикционными эндонуклеазами 93
2.6. Перенос ДНК из агарозных гелей на мембранные фильтры (блоттинг) 94
2.7. Нозерн-блот и дот-блот анализ 95
2.8. Радиоактивное мечение препаратов ДНК 96
2.9. Блот-гибридизация ДНК 97
2.10. Получение протопластов 98
2.11. Выделение белков из растений 99
2.12. Электрофорез белков 99
2.13. Определение протеинкиназной активности
2.14. Определение уровня фосфорилирования белков in vitro 100
2.15. Экстракция фитогормона из растений и последующее определение концентрации АБК
2.16. Выделение и очистка плазмидной ДНК 102
2.17. Выделение ДНК из бактерий 104
2.18. Препаративный гель-электрофорез и элюция ДНК 104
2.19. Подготовка компетентных клеток Е. coli. 105
2.20. Трансформация компетентных клеток E.coli плазмидной ДНК 105
2.21. Полимеразная цепная реакция 106
2.22. Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени 109
2.23. Автоматическое секвенирование ДНК ферментативным методом 111
2.24. Синтез кДНК 111
2.25. Оценка степени метилирования ДНК 111
2.26. Компьютерный анализ нуклеотидных последовательностей 112
2.27. Статистическая обработка данных 113
2.28. Реактивы и материалы 113
ГЛАВА 3. Результаты исследований и их обсуждение 118
Роль белков холодового шока, дегидринов и лектинов в защите растений
от повреждающего действия низкотемпературного стресса
3.1. Механизмы регуляции экспрессии гена белка холодового шока CSP5 в растениях капусты при низкотемпературном стрессе и обработке гормонами
3.1.1. Клонирование гена белка холодового шока капусты 120
3.1.2. Экспрессия гена белка холодового шока капусты в стрессовых условиях
3.1.3. Восприятие и трансдукция холодового сигнала в клетках капусты
3.1.4. Гормональная регуляция экспрессии гена белка холодового шока капусты
3.1.5. Участие факторов CBF в регуляции экспрессии гена белка 157
холодового шока капусты
3.1.4.1. Определение нуклеотидной последовательности гена CBF капусты 157
3.1.4.2. Экспрессия гена CBFкапусты при холодовом стрессе 164
3.1.4.3. Изменение уровня экспрессии гена CBF капусты при закаливании растений
3.1.4.4. Изменение степени метилирования ДНК промоторной области гена CBF капусты Brassica oleracea L. при холодовой акклимации
3.1.4.5. Степень метилирования ДНК промоторной области гена CBF капусты Brassica oleracea L. при различных температурных условиях выращивания
3.2. Множественные пути гормональной регуляции экспрессии генов дегидринов в растениях пшеницы в норме и при холодовом стрессе
3.3. Участие лектина в формировании устойчивости растений пшеницы к холодовому стрессу
Заключение 199
Выводы 202
Список литературы
